淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
DBE能夠?qū)Ｒ恍缘亓呀庵ф湹矸鄣摩?/span>-1，6糖苷鍵，產(chǎn)生線性的葡萄糖鏈，在調(diào)整支鏈淀粉分子的鏈長方面有重要的作用。
淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒測定原理
采用3，5-二硝基水楊酸法測定DBE催化支鏈淀粉產(chǎn)生的還原糖，通過測定還原糖含量的變化來計算DBE活性。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前每支加入6mL試劑一，充分混勻后備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體35mL×1瓶，4℃保存。
淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒粗酶液提取
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 |
95℃水浴5min后滅活的樣本 | 200 |
|
粗酶液 |
| 200 |
試劑一 | 200 |
|
試劑二 |
| 200 |
混勻，37℃準(zhǔn)確保溫2h
混勻，95℃水浴5min，于1mL玻璃比色皿540nm處讀取各管吸光值。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設(shè)個一個對照管。
注 意：可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行5min 95℃沸水浴處理。
淀粉脫分支酶（Starch debranching enzyme，DBE）試劑盒DBE活力單位的計算
標(biāo)準(zhǔn)條件測定回歸方程為y = 3.8458x - 0.165；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
（1）按照蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每h催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
DBE活力(mg /min /g鮮重)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V反總]÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=0.26× (ΔA+0.165) ÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.4mL； V樣：加入樣本體積，0.2mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.1mg/mL-1mg/mL。
ΔA線性范圍為0.01-2。
關(guān)鍵字： 淀粉脫分支酶（Starch debran;淀粉脫分支酶（Starch debran;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點實驗室廣泛使用，深受廣大科研人員好評，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務(wù)周到。