半胱氨酸（cysteine, Cys）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
半胱氨酸（cysteine, Cys）含量測(cè)定試劑盒測(cè)定意義：
蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys是唯一一種含有巰基的含硫氨基酸，從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成，經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，并且補(bǔ)充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。
測(cè)定原理：
Cys還原磷鎢酸生成鎢藍(lán)，在600nm處有吸收峰；通過(guò)600nm吸光度，計(jì)算Cys含量。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、85％磷酸和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。用前1天，向試劑三中加5 mL蒸餾水充分溶解，再加85％磷酸1.25mL，混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴2h；冷卻后加20 mL蒸餾水，4℃可保存2周。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液，4℃避光保存。用不完的試劑4℃可保存3天。
半胱氨酸（cysteine, Cys）含量測(cè)定試劑盒半胱氨酸提取：
1、 液體樣品中半胱氨酸提取：取0.1mL液體樣品，加試劑一0.9mL，充分混勻，8000g
4℃離心10min，取上清液，待測(cè)。
2、 組織中半胱氨酸提?。?/span>按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10 min，取上清液待測(cè)。
3、 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
半胱氨酸（cysteine, Cys）含量測(cè)定試劑盒測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到600 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入100 μL蒸餾水，500μL試劑二，500μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測(cè)定吸光值，記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)液，500μL試劑二，500μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測(cè)定吸光值，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：取1mL玻璃比色皿，加入100 μL上清液，500μL試劑二，500μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測(cè)定吸光值，記為A測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計(jì)算公式：
1. 按液體樣品的體積計(jì)算：
半胱氨酸含量（μmol/mL）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×（V樣總÷V樣）=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算：
半胱氨酸含量（μmol/g鮮重）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×（V樣總÷V樣）÷W=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷W
3. 按照蛋白濃度計(jì)算：
半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]÷（V樣×Cpr）=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷Cpr
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：
氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)] ×（V樣總÷V樣×細(xì)胞數(shù)量）=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1μmol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.1 mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL。W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
最低檢出限為100μmol/L。
關(guān)鍵字： 半胱氨酸（cysteine, Cys）含;半胱氨酸（cysteine, Cys）含;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類(lèi)試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶(hù)厚愛(ài)，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以?xún)?yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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