1. 用生理鹽水將抗原稀釋到2倍最終濃度(按每針次50μl用量配制)。
備注:推薦使用的抗原用量為
(1)免疫原性較強(qiáng)的滅活全病毒或全細(xì)菌以及病毒樣顆??乖酷槾?-5μg;
(2)免疫原性較弱的亞單位蛋白抗原每針次5-20μg;
(3)偶聯(lián)了載體蛋白的小分子抗原每針次20-50μg。
2. 充分混勻佐劑,無(wú)菌條件下取出所需用量(按每針次50μl)與抗原按體積比1:1迅速混勻。
備注:本佐劑產(chǎn)生沉淀屬正?,F(xiàn)象,與抗原混合操作越快越好。
3. 通過后腿小腿肌肉注射免疫小鼠(
),每只小鼠注射100μl。
備注:本佐劑與抗原混合后產(chǎn)生沉淀屬正?,F(xiàn)象,抽入針管前應(yīng)充分混勻,抽入針管后應(yīng)盡快注射。
4. 第21天按同樣方式加強(qiáng)免疫1針。
備注:每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。
5. 第35天采微量尾血進(jìn)行ELISA測(cè)定,抗體滴度應(yīng)在1:10000-1:10000000范圍內(nèi),隨后即可采全血或按常規(guī)方法進(jìn)行抗原沖擊免疫和脾細(xì)胞融合。
QuickAntibody系列免疫佐劑包括以下具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、獨(dú)特配方的新型免疫佐劑,分別用于制備小鼠單克隆和多克隆抗體(見下表)。
與常規(guī)使用的弗氏佐劑相比,QuickAntibody免疫佐劑具有免疫周期短、針次少、無(wú)需乳化、抗原用量低、抗體滴度高、抗體親合力高、易獲得構(gòu)象型表位的抗體等多方面優(yōu)點(diǎn),詳述如下:
1. QuickAntibody只需兩針免疫,無(wú)論是用于單克隆還是多克隆抗體制備,與弗氏佐劑相比可減少免疫針次。
2. QuickAntibody通過減少免疫針次和降低每針次抗原用量,從而可大大節(jié)省總抗原用量。推薦使用的抗原用量為(1)免疫原性較弱的亞單位蛋白抗原每針次5-50μg(通常為小鼠5-20μg,
兔子20-50μg);(2)免疫原性較強(qiáng)的滅活全病毒或全細(xì)菌以及病毒樣顆??乖酷槾?-10μg(通常為小鼠1-5μg ,兔子5-10μg)。
3. QuickAntibody抗體產(chǎn)生快,抗體滴度高,抗體親合力高。以標(biāo)準(zhǔn)免疫程序?yàn)槔?,無(wú)論是用于單克隆還是多克隆抗體制備,只需要在三周內(nèi)進(jìn)行兩針免疫,通常在第五周即可獲得ELISA滴
度(Cutoff值為0.1000)高達(dá)1:10000-1:10000000的高親合力抗體水平。
4. QuickAntibody不破壞抗原天然構(gòu)象,從而易于篩選獲得針對(duì)構(gòu)象型抗原表位的單克隆抗體,這是弗氏佐劑所不具備的一個(gè)重要特點(diǎn)。
5. QuickAntibody是水溶性佐劑,使用時(shí)不需要弗氏佐劑的復(fù)雜乳化過程,抗原和佐劑只需簡(jiǎn)單混合即可免疫動(dòng)物。
6. QuickAntibody使用肌肉免疫途徑,與常規(guī)小鼠單克隆抗體制備過程中使用足墊或脾內(nèi)免疫相比,極大方便了使用。
7. QuickAntibody的一個(gè)重要用途是可方便地用于制備小鼠多克隆抗體。常規(guī)多克隆抗體制備多使用兔子,不但免疫針次多、抗原用量大和抗體產(chǎn)生慢,而且由于技術(shù)要求較高而往往需要委
托專門單位制備。使用QuickAntibody免疫佐劑,任何實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人員均可方便快速地制備小鼠多克隆抗體,標(biāo)準(zhǔn)免疫程序只需要簡(jiǎn)單地免疫5只小鼠,即可在五周后獲得1ml高質(zhì)量的小鼠多克
隆抗體。(強(qiáng)烈推薦使用本佐劑制備小鼠多克隆抗體,1ml高質(zhì)量的小鼠多克隆抗體足以滿足絕大多數(shù)用戶的實(shí)驗(yàn)需求,包括用于酶聯(lián)免疫、免疫印跡、流式細(xì)胞、免疫組化和免疫沉淀等)。
8. QuickAntibody建議常溫運(yùn)輸,2~8oC保存,無(wú)菌取用,有效期18個(gè)月。
蘇州博特龍免疫技術(shù)有限公司
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