一、細(xì)胞基本屬性 |
細(xì)胞名稱 | 人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) |
細(xì)胞別稱 | NCI-H292; H292; H-292; NCI-HUT-292; Hut292; NCIH292 |
細(xì)胞貨號 | SNL-047 |
細(xì)胞種屬 | 人 |
生長情況 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
換液周期 | 2-3天 |
培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml |
傳代比例 | 1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定) |
傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基; 2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s,吸走潤洗的PBS; 3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層; 4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化; 5.消化到細(xì)胞間隙變大,但未完全脫落時加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化; 6.混勻細(xì)胞,900rpm離心3-5min,棄上清; 7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里; 8.補足完全培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng); |
注意事項 | 不同品牌胰酶消化時間差別較大,注意嚴(yán)格控制消化時間 消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。 |
三、細(xì)胞凍存操作 |
凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦); |
凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml,1ml每管 |
凍存方法 | 1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞; 2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管; 3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案 |
Tips:
1.細(xì)胞貼壁偏緊,消化時間偏長,注意控制消化時間;
2.細(xì)胞培養(yǎng)時黑點可能會比較多,具體原因參見培養(yǎng)操作說明2、3條;
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