| 一、細(xì)胞基本屬性 |
| 細(xì)胞名稱 | 小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 |
| 細(xì)胞別稱 | CT26.WT |
| 細(xì)胞貨號 | SNL-117 |
| 細(xì)胞種屬 | 小鼠 |
| 生長情況 | 貼壁 |
| 培養(yǎng)條件 | 1640+10%FBS+1%雙抗 |
| 培養(yǎng)環(huán)境 | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
| 換液周期 | 2-3天 |
| 培養(yǎng)基體積 | T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml |
| 傳代比例 | 1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定） |
| 傳代方法 | 1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)； |
| 注意事項 | 不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間
消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。 |
| 三、細(xì)胞凍存操作 |
| 凍存液配方 | 92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦); |
| 凍存規(guī)格 | 200-300萬/ml，1ml每管 |
| 凍存方法 | 1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存 |
| 注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 |
Tips：
1.細(xì)胞貼壁較弱，消化時間偏短，注意控制消化時間；
2.注意控制細(xì)胞密度，過高或者過低都可能影響細(xì)胞狀態(tài)，不要長時間高密度培養(yǎng)；
3.細(xì)胞密度過高時及時傳代，避免培養(yǎng)基變黃導(dǎo)致細(xì)胞脫落或者狀態(tài)變差；
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