無(wú)蛋白非程序性細(xì)胞凍存液

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。

本產(chǎn)品是一種不含胎牛血清和其它動(dòng)物源性蛋白成份的細(xì)胞凍存試劑，由細(xì)胞膜保護(hù)劑、滲透性和非滲透性保護(hù)劑組成，并添加細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，凍存細(xì)胞的同時(shí)提高細(xì)胞的存活率。

二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。

本產(chǎn)品低溫運(yùn)輸，-20 ℃保存，有效期 12 個(gè)月。使用過(guò)程中，4 ℃保存，1 個(gè)月內(nèi)用完，避免反復(fù)凍融。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

1. 與市面其它類(lèi)似產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品純由化學(xué)物質(zhì)配制而成，不含任何動(dòng)物源性成份，可用于常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞和臨床治療用細(xì)胞的凍存。

2. 本產(chǎn)品凍存細(xì)胞時(shí)不需要程序性降溫盒，重懸細(xì)胞后可直接置于-80 ℃冰箱中保存，12 h 后轉(zhuǎn)到液氮中保存，或一直存放于-80 ℃冰箱中保存（6 個(gè)月）。

3. 本產(chǎn)品凍存細(xì)胞效果好，細(xì)胞復(fù)蘇率高，與含有胎牛血清（FBS）的凍存液效果一致。

4. 本產(chǎn)品中的 DMSO 含量為 5%，對(duì)凍存細(xì)胞的毒性較小。

四、使用說(shuō)明。

1. 細(xì)胞凍存。

1) 細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞接種于直徑為 100 mm 的培養(yǎng)皿中，24 或 48 h 后密度達(dá)到 80%左右，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

2) 細(xì)胞收集。胰酶消化法收集貼壁細(xì)胞（或直接收集懸浮細(xì)胞），1 000 rpm，離心 5 min，棄上清。

3) 細(xì)胞凍存。加入 2 ml 無(wú)蛋白非程序性細(xì)胞凍存液，混勻，分裝于 2 支凍存管，置于-80 ℃冰箱中，12 h 后轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。

2. 細(xì)胞復(fù)蘇。

1) 預(yù)熱。提前開(kāi)啟水浴鍋，溫度調(diào)整到 37 ℃（或 42 ℃，能夠促進(jìn)細(xì)胞凍存液更快的融化）。

2) 細(xì)胞復(fù)蘇。從液氮罐或-80 ℃冰箱中取出凍存細(xì)胞，立即置于預(yù)熱后的水浴鍋中，快速晃動(dòng)凍存管，使凍存細(xì)胞盡快融化。

3) 離心。將融化的凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有9 ml細(xì)胞培養(yǎng)液的離心管中，混勻，1 000 rpm，離心5 min，棄上清。（融化的凍存細(xì)胞也可直接離心）

4) 細(xì)胞培養(yǎng)。在離心管中加入 1 ml 的細(xì)胞培養(yǎng)液，混勻，轉(zhuǎn)入含有 9 ml 細(xì)胞培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，混勻，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5) 檢測(cè)。24 h 后觀察細(xì)胞貼壁情況和生長(zhǎng)狀態(tài)。

五、注意事項(xiàng)。

1. 為了保證細(xì)胞凍存效果，細(xì)胞凍存時(shí)應(yīng)該生長(zhǎng)良好，盡量處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

2. 凍存細(xì)胞的密度一般控制在 1-5 ×106 cells / mL 左右，密度過(guò)低或過(guò)高都會(huì)影響凍存效果。

3. 細(xì)胞復(fù)蘇后離心除去細(xì)胞凍存液，避免細(xì)胞凍存液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

4. 本產(chǎn)品凍存的細(xì)胞可以在-80 ℃冰箱中保存 6 個(gè)月，長(zhǎng)期保存時(shí)請(qǐng)轉(zhuǎn)入液氮罐。