慢病毒純化試劑盒 （磁珠型）

一、產(chǎn)品簡介。

本產(chǎn)品是一款以磁珠為分離介質(zhì)的慢病毒純化試劑。在特定的緩沖體系中，磁珠可吸附慢病毒，并被特定的洗脫液（或 PBS 與 ddH2O）洗脫下來。慢病毒純化后，滴度提高 10 倍以上，且利用 PBS或 ddH2O 洗脫后的慢病毒不含其它化合物，可直接用于動物體內(nèi)注射。

二、運輸與存儲條件。

本產(chǎn)品低溫運輸，4 ℃保存，有效期 12 個月。

三、特點與優(yōu)勢。

1. 本試劑純化效率高，磁珠吸附慢病毒的效率達到 95%以上。

2. 純化后的慢病毒滴度提高 10 倍以上。

3. 本試劑盒純化的慢病毒不含其它化合物，可以直接用于動物實驗。

4. 本試劑盒操作簡單，能夠在 2 h 內(nèi)完成慢病毒的純化實驗。

四、使用說明。

1. 慢病毒包裝。慢病毒包裝實驗請參考本公司產(chǎn)品（慢病毒包裝試劑盒，Cat：OmL-01）說明書中的實驗步驟。

2. 含慢病毒的細胞培養(yǎng)上清收集。293T 細胞（直徑為 100 mm 培養(yǎng)皿培養(yǎng)）轉(zhuǎn)染慢病毒包裝質(zhì)粒及骨架質(zhì)粒后 48 h，收集批細胞培養(yǎng)上清（10 ml），并加入 10 ml 新鮮細胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng) 24-48 h，收集第二批細胞培養(yǎng)上清（第二批收集的細胞培養(yǎng)上清中慢病毒滴度高于批）。所有含有慢病毒的細胞培養(yǎng)上清保存在 4℃冰箱中。

3. 慢病毒純化。本產(chǎn)品提供的慢病毒純化體系是 20 ml，各組份如下表。參照下表將各種試劑與含有慢病毒的細胞培養(yǎng)上清加入 50 ml 無菌離心管中，置于旋轉(zhuǎn)混合器中，4 ℃旋轉(zhuǎn)混合 60 min。

4. 磁珠收集。將離心管置于磁力架上，4 ℃靜置 5-10 min，使磁珠聚集，棄上清（或 5 000 rpm，4 ℃離心 5 min，沉淀磁珠，棄上清）

5. 殘余液體去除。將裝有磁珠沉淀的離心管轉(zhuǎn)入離心機，5 000 rpm，4 ℃離心 1-2 min，用移液器吸盡管中殘余液體。

6. 洗脫。加入 1.2 ml Buffer LE（或 PBS 與 ddH2O），劇烈震蕩（Vortex）1 min，8 000 rpm，4 ℃離心 2 min，立即將上清轉(zhuǎn)移至新的無菌 EP 管中，即為純化的慢病毒溶液。

7. 過濾。利用試劑盒提供的針式過濾器，過濾純化的慢病毒溶液，除去雜質(zhì)。

8. 純化的慢病毒可立即用于滴度測定，或感染目的細胞，也可保存在 4 ℃（有效期 1 個月）。

9. 感染細胞時，純化的慢病毒溶液與細胞培養(yǎng)液按照不同比例混合（一般情況下等比例混合），加入細胞中，并添加 polybrene 或本公司的慢病毒感染增強試劑盒（Cat：OmL-04）中的病毒感染增強試劑。

10. 慢病毒感染 24 h，換液，72 h 后觀察 GFP 熒光強度或檢測目的蛋白表達變化。

五、注意事項。

1. 磁珠不可凍存，否則失效。

2. 強烈建議使用本公司的慢病毒感染增強試劑盒（Cat：OmL-04）來提高慢病毒的感染效率。

3. 請使用試劑盒提供的針式過濾器過濾純化的慢病毒溶液，不要使用常規(guī)的 0.2 μm 和 0.45 μm 孔徑濾膜的濾器過濾，以免降低慢病毒滴度。

4. 純化的慢病毒保存條件：4 ℃，一個月；-80 ℃，長期保存，但凍存后慢病毒活性降低。

5. 含慢病毒的細胞培養(yǎng)上清不用離心和過濾，直接用于慢病毒純化，效果較好。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。