慢病毒包裝試劑盒
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。
本產(chǎn)品包括慢病毒包裝質(zhì)粒（Lenti-Mix）、陽性對(duì)照質(zhì)粒（lenti-GFP）、質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染試劑（Omifection）和病毒感染增強(qiáng)試劑（polybrene），其中包裝質(zhì)粒能夠與已經(jīng)構(gòu)建的慢病毒骨架質(zhì)粒聯(lián)合，生產(chǎn)高滴度的慢病毒。
二、運(yùn)輸和存儲(chǔ)條件。
1. 本產(chǎn)品低溫運(yùn)輸，各組份依據(jù)保存條件分開保存，自購(gòu)買之日起，有效期為 12 個(gè)月。
2. Omifection 與 Polybrene 嚴(yán)禁凍存。
三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。
1. 本試劑盒中的包裝質(zhì)粒能夠與多家公司提供的慢病毒骨架質(zhì)粒配合，生產(chǎn)高滴度的慢病毒。
2. 本試劑盒中的轉(zhuǎn)染試劑 Oimifection，轉(zhuǎn)染效率高，可以保證生產(chǎn)高滴度的慢病毒。
四、自備試劑與耗材。
1. OPTI-MEM 培養(yǎng)液 (Gibco)
2. 293T 細(xì)胞，是 293TN 細(xì)胞（System Biosciences），病毒生產(chǎn)量大。
五、 使用說明
1. 慢病毒包裝。
1) 細(xì)胞培養(yǎng)。293T 細(xì)胞傳代接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿（Φ 100 mm），置于 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h 后細(xì)胞密度達(dá)到 60%～80%。（細(xì)胞密度不宜過大，否則影響轉(zhuǎn)染效率）
2) 轉(zhuǎn)染。向 Lenti-Mix 中加入 1 mL OPTI-MEM 培養(yǎng)液，再加入 9 μg 慢病毒骨架質(zhì)粒（目的蛋白過表達(dá)或 RNAi 質(zhì)粒，或一管 GFP 對(duì)照質(zhì)粒），混勻，加入 54 μL 轉(zhuǎn)染試劑 Omifection，混合 10 次，室溫靜置 30 min，滴加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，輕輕搖勻。
3) 換液。轉(zhuǎn)染 6-12 h，更換成新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
4) 慢病毒收集。轉(zhuǎn)染 48 h，收集批含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清（暫時(shí)置于 4 ℃冰箱中保存），5) 293T 細(xì)胞中再加入 10 ml 新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液，24-48 h 后，收集第二批含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清（第二批細(xì)胞培養(yǎng)上清中的慢病毒滴度高于批）。
6) 離心。含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清轉(zhuǎn)入離心機(jī)，3 000 rpm，4 ℃離心 5 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)入新的無菌離心管，即為含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清。
7) 含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清可在 4 ℃保存 1 個(gè)月，長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-80 ℃，但凍融一次，病毒感染效果降低 30-50%。
2. 慢病毒感染
1) 目的細(xì)胞培養(yǎng)。目的細(xì)胞傳代后接種到細(xì)胞培養(yǎng)皿（Φ 100 mm）中，24 h 后細(xì)胞密度達(dá)到30%-50%。
2) 慢病毒感染。棄培養(yǎng)液，加入 5 ml 新鮮培養(yǎng)液和 5 mL 含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，再加入病毒感染增強(qiáng)試劑（polybrene，1: 500-1:2000 稀釋），輕搖，混勻。
3) 換液。病毒感染 12-24 h 后更換成新鮮的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，若無細(xì)胞毒性，可以不換液。
4) 檢測(cè)。慢病毒感染 72 h，熒光顯微鏡下觀察 GFP 表達(dá)情況，或檢測(cè)目的基因表達(dá)水平。
六、注意事項(xiàng)。
1. 請(qǐng)使用高純度的慢病毒骨架質(zhì)粒用于轉(zhuǎn)染，質(zhì)粒的 OD260/OD280 比值在 1.8～2.0 之間為宜。
2. 293T 細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)于病毒包裝至關(guān)重要，因此需要保證良好的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，一般使用代數(shù)較低（20 代以內(nèi)）的 293T（N）細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝。
3. 293T 細(xì)胞的密度應(yīng)該控制在 60-80%之間，密度過低，病毒產(chǎn)量較低，密度過高，則轉(zhuǎn)染效率降低，也會(huì)導(dǎo)致慢病毒滴度的降低。
4. 本試劑盒提供的轉(zhuǎn)染試劑（Omifection）與病毒感染增強(qiáng)試劑（polybrene）嚴(yán)禁凍存。
5. 為了增強(qiáng)慢病毒感染效果，可以使用本公司的慢病毒感染增強(qiáng)試劑盒（Cat：OmL-04），其感染增強(qiáng)效果比對(duì) Polybrene 可以提高 4-8 倍。
關(guān)鍵字： 慢病毒包裝試劑盒;Omifection;polybrene;
公司是一家新設(shè)立的以新藥研發(fā)、技術(shù)服務(wù)、醫(yī)藥研究服務(wù)為主要業(yè)務(wù)的公司，主要經(jīng)營(yíng)范圍為：醫(yī)藥、生物領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、服務(wù)、咨詢、轉(zhuǎn)讓；醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展；銷售化工產(chǎn)品（不含危險(xiǎn)化學(xué)品及一類易制毒化學(xué)品）、儀器儀表、機(jī)械設(shè)備、電子產(chǎn)品、計(jì)算機(jī)軟件、及輔助設(shè)備、第二類醫(yī)療器械。
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