"EC9706:人食管癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

KMB-17細胞類似產(chǎn)品：：TE354T細胞、IOSE-80細胞、Med 283細胞

NCI-H2170細胞類似產(chǎn)品：：Intestinal Porcine Epithelial Cell line-J2細胞、BHT101細胞、COLO-824細胞

NCI-H157細胞類似產(chǎn)品：：Tu 212細胞、SUD4細胞、CAL 12T細胞

IB-RS2細胞類似產(chǎn)品：：SW-1417細胞、MKN-45細胞、OUMS-23細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

EC9706:人食管癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

Hs 343.T細胞類似產(chǎn)品：：TN5B14細胞、HKC細胞、V79-1細胞

CC-LP-1細胞類似產(chǎn)品：：HCC-2279細胞、TE-11細胞、HEC1B細胞

HOS-TE85細胞類似產(chǎn)品：：SkMel31細胞、MS1細胞、OCI/AML-4細胞

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升GAO到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞傳代方法：１：２傳代

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁生長

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導致細胞生長不均勻。研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C 太久。一些懸浮細胞抱團生長是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很GAO的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制HAO細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)（該方法只能去除部分較大的細胞團）。部分細胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等），這個是正常現(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài)；如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細胞代次較GAO，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

Vero-E6細胞類似產(chǎn)品：：LS-513細胞、KMH-2細胞、PSN1細胞

H-1876細胞類似產(chǎn)品：：DHL-6細胞、SNU-182細胞、AML-193細胞

BSC1細胞類似產(chǎn)品：：Granta-519細胞、SNU-119細胞、H69/P細胞

SU8686細胞類似產(chǎn)品：：BRL3A細胞、PANC-28細胞、LuCL4細胞

SNU1040細胞類似產(chǎn)品：：16HBE14o-細胞、PLA-801D細胞、RSC 96細胞

NCIH2066細胞類似產(chǎn)品：：CAL-62細胞、hTERT-HME-1細胞、SUDHL10細胞

NCI-H1876細胞類似產(chǎn)品：：H-647細胞、RBL細胞、RKO細胞

HR1K細胞類似產(chǎn)品：：JB6 Cl 30-7b細胞、TM-4細胞、IB-RS2細胞

IHH細胞類似產(chǎn)品：：HS5細胞、Jurkat-E6細胞、LPC-H12細胞

SCL II細胞類似產(chǎn)品：：IBRS-2細胞、HO-8910細胞、J774.A1細胞

B16BL6細胞類似產(chǎn)品：：HEI193細胞、Rat Basophilic Leukemia-1細胞、MSF細胞

SCaBER細胞類似產(chǎn)品：：QGY7703細胞、RGC6細胞、L 428細胞

UCLA NPA871細胞類似產(chǎn)品：：MADB106細胞、A2780 CP70細胞、MDAMB361細胞

X63-Ag 8.6.5.3細胞類似產(chǎn)品：：MX1細胞、FRH-0201細胞、H-1581細胞

NCI-H295細胞類似產(chǎn)品：：NCIH2141細胞、HUC-1細胞、Keio University-19-19細胞

NCIH1963細胞類似產(chǎn)品：：C1498細胞、NR-8383細胞、ES2細胞

CL1.0細胞類似產(chǎn)品：：COR-L 105細胞、M14-MEL細胞、MMAc-Serum Free細胞

PCI-4B細胞類似產(chǎn)品：：GDM-1細胞、NUGC4細胞、HUT125細胞

University of Michigan-Urothelial Carcinoma-1細胞類似產(chǎn)品：：A 375細胞、RLE-6TN細胞、NCM-460細胞

HEK293-A細胞類似產(chǎn)品：：UPCI:SCC154細胞、H-2170細胞、C-4-I細胞

MARC-145細胞類似產(chǎn)品：：MC-26細胞、HUVEC細胞、HOMEC細胞

SK-MES1細胞類似產(chǎn)品：：G519細胞、MCF7-CTRL細胞、MB468細胞

HCC0827細胞類似產(chǎn)品：：RPMI-8402細胞、3 LL細胞、IBRS-2細胞

SUNE 1細胞類似產(chǎn)品：：Buffalo Rat Liver-3A細胞、SUDHL6細胞、GLAG-66細胞

EC9706:人食管癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

RPMI no. 8226細胞類似產(chǎn)品：：BHT-101細胞、G292細胞、Rat Basophilic Leukemia-1細胞

LC-1/sq細胞類似產(chǎn)品：：Panc 10.05細胞、Scott細胞、EC-GI細胞

CHO-S細胞類似產(chǎn)品：：OPM-2細胞、NTera2 cl.D1細胞、KMB17細胞

H-220細胞類似產(chǎn)品：：Cor L51細胞、SV-HUC-1細胞、PK 15細胞

Pa017C細胞類似產(chǎn)品：：PLA802細胞、CWR22Rv1細胞、Li-7細胞

TEV-1細胞類似產(chǎn)品：：4175細胞、Pan02細胞、Normal fibroblast-10細胞

MKN 7細胞類似產(chǎn)品：：MCAEC細胞、COR-L279細胞、JEG-3細胞

Panc203細胞類似產(chǎn)品：：SCH細胞、HCASMC細胞、Human podocyte細胞

LM8細胞類似產(chǎn)品：：ECV 304細胞、PK-13細胞、Centre Antoine Lacassagne-62細胞

H460細胞類似產(chǎn)品：：Karpas 299細胞、87MG細胞、MA 104細胞

BIC細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1563細胞、Adeno 293細胞、Panc-3_27細胞

SUNE 1細胞類似產(chǎn)品：：Buffalo Rat Liver-3A細胞、SUDHL6細胞、GLAG-66細胞

SKOV-3細胞類似產(chǎn)品：：MOLT 3細胞、MADB-106細胞、G-292細胞

H-4細胞類似產(chǎn)品：：MV522細胞、EOC20細胞、RBL 1細胞

LoMeT-ccRcc細胞類似產(chǎn)品：：RASMCs細胞、EoL-1細胞、OVCAR.5細胞

OAW42細胞類似產(chǎn)品：：EAC細胞、M210B4細胞、MDA-MB-175-VII細胞

Jurkat-E6細胞類似產(chǎn)品：：Baby Hamster Kidney-21細胞、WM-451Lu細胞、NIH 3T6細胞

H-2444細胞類似產(chǎn)品：：CAL85-1細胞、PA-1細胞、NCI-H1341細胞

DAKIKI Clone 1細胞類似產(chǎn)品：：A-431細胞、766T細胞、LLC-MK-2細胞

RL95-2細胞類似產(chǎn)品：：Clone 166細胞、GM03570細胞、Molm 13細胞

OCI-Ly 19細胞類似產(chǎn)品：：SK-HEP-1細胞、UCLA RO-81-A-1細胞、J 82細胞

Y3M細胞類似產(chǎn)品：：HCCLM3細胞、DiFi細胞、DHL8細胞

NFHIOSE-80細胞類似產(chǎn)品：：Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1細胞、RBL2H3細胞、COLO394細胞

SK-NMC細胞類似產(chǎn)品：：Swiss 3T6細胞、PAI細胞、MAEC細胞

GM05372E細胞類似產(chǎn)品：：SNU423細胞、NBL-7細胞、L5178YR細胞

LOU-NH-91細胞類似產(chǎn)品：：MCF-7/AdrR細胞、SUP-M2細胞、C-33-A細胞

KP-N-NS細胞類似產(chǎn)品：：CV 1細胞、NTERA-2cl.D1細胞、OVCAR420細胞

SK-N-DZ細胞類似產(chǎn)品：：A-1847細胞、EC109細胞、BEL 7405細胞

QGP 1細胞類似產(chǎn)品：：H-35細胞、LTEPsm細胞、CATH.a細胞

P3/X63/Ag8細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1666細胞、HFSF細胞、CAL-62細胞

H23細胞類似產(chǎn)品：：EC-GI細胞、HUSMC細胞、2T細胞

DMS114細胞類似產(chǎn)品：：LL/2細胞、Nb 2細胞、HCC-9204細胞

CAL78細胞類似產(chǎn)品：：MFE-296細胞、Hs 737.T細胞、OEC19細胞

SW-480細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H78細胞、MSB-1細胞、BALL-1細胞

OE-33細胞類似產(chǎn)品：：MEC1細胞、Hs 934.T細胞、KM12 SM細胞

LU451細胞類似產(chǎn)品：：J82 COT細胞、32D.3細胞、JC細胞

293c18細胞類似產(chǎn)品：：NCIH23細胞、AR4-IP細胞、A427細胞

BSC1細胞類似產(chǎn)品：：Granta-519細胞、EU-2細胞、BEAS 2B細胞

BIU-87/Adr細胞類似產(chǎn)品：：OVCA 432細胞、PF-382細胞、KYSE50細胞

H184A1細胞類似產(chǎn)品：：28SC細胞、Baby Hamster Kidney 21細胞、Hs888 Lu細胞

OCI Ly1細胞類似產(chǎn)品：：NCIH1437細胞、P3X63 Ag8.653細胞、SUDHL-2細胞

L5178-R細胞類似產(chǎn)品：：Karpas-299細胞、GM3190細胞、P3X63-Ag8.653細胞

CAL62細胞類似產(chǎn)品：：H-2405細胞、NCI-H-82細胞、AgC11x3A細胞

Highly Aggressively Proliferating Immortalized細胞類似產(chǎn)品：：THP 1細胞、IGR-OV1細胞、BHK-21細胞

hSCC-25細胞類似產(chǎn)品：：SF 295細胞、K1735細胞、HDF-a細胞

GM03573細胞類似產(chǎn)品：：L5178Y TK+/-3.7.2c細胞、GM03320細胞、H-2141細胞

MM6細胞類似產(chǎn)品：：Kit225細胞、Rabbit Kidney 13細胞、C3A細胞

MNNG-HOS細胞類似產(chǎn)品：：OCI-LY-3細胞、GB1細胞、TMD-8細胞

PaCa2細胞類似產(chǎn)品：：NTera-2D1細胞、118MG細胞、OCILY19細胞

HANK-1細胞類似產(chǎn)品：：HPAF-II/CD18細胞、Hs274T細胞、NCI-H1618細胞

HEK-293F細胞類似產(chǎn)品：：Jurkat E6細胞、FTC-133細胞、COLO 320DM細胞

NCI-441細胞類似產(chǎn)品：：SGC-996細胞、HCC-1569細胞、A 253細胞

R2C細胞類似產(chǎn)品：：Y3-Ag1,2,3細胞、SW-620細胞、HOP-92細胞

Mono-Mac-1細胞類似產(chǎn)品：：ssMCF7細胞、ATC241細胞、Normal Rat Kidney細胞

SKLMS-1細胞類似產(chǎn)品：：NTERA2D1細胞、ASPC1細胞、16-HBE14o細胞

SP2-0-Ag14細胞類似產(chǎn)品：：KNS-81細胞、Toledo細胞、MHH-CALL2細胞

VM-CUB-1細胞類似產(chǎn)品：：BT-483細胞、SF-126細胞、AU565細胞

PC9細胞類似產(chǎn)品：：CNE1細胞、HME-1細胞、SU-DHL-6細胞

P-3J細胞類似產(chǎn)品：：TE14細胞、NCI-H1944細胞、VMCUB-1細胞

138 MG細胞類似產(chǎn)品：：HCC-9724細胞、A-204細胞、C2BBe1細胞

N-9細胞類似產(chǎn)品：：PK15細胞、MSF細胞、CG4細胞

TFK1細胞類似產(chǎn)品：：ID8細胞、H520細胞、HCC1143細胞

CHO-S細胞類似產(chǎn)品：：OPM-2細胞、NTera2 cl.D1細胞、KMB17細胞

Tb 1 Lu細胞類似產(chǎn)品：：MCF.10A細胞、BEL 7402細胞、NHRF細胞

FET細胞類似產(chǎn)品：：CTLL-2細胞、N-Tera-2細胞、H-1563細胞

HEC-1B細胞類似產(chǎn)品：：HPB/ALL細胞、SW-982細胞、H226細胞

Duke University 4475細胞類似產(chǎn)品：：SUM-190PT細胞、EM3細胞、CMT64細胞

HLF-a細胞類似產(chǎn)品：：TW01細胞、MDAMB330細胞、COLO.205細胞

U118-MG細胞類似產(chǎn)品：：SV-HUC細胞、brain-derived Endothelial cells.3細胞、GH 3細胞

SU86_86細胞類似產(chǎn)品：：HFL-I細胞、Melan-a細胞、L-Wnt3A細胞

H-1963細胞類似產(chǎn)品：：CTX TNA2細胞、OCI-AML-4細胞、SK-MEL24細胞

KP-2細胞類似產(chǎn)品：：NBL-S細胞、Colo-206F細胞、NCI-SNU-16細胞

3T3-L1 ad細胞類似產(chǎn)品：：D-283 Med細胞、Hs 819.T細胞、H2009細胞

CoC1細胞類似產(chǎn)品：：D324細胞、L540細胞、74Int細胞

CHL-IU細胞類似產(chǎn)品：：KU-812-F細胞、SK-BR3細胞、QGY-7703細胞

SW 780細胞類似產(chǎn)品：：Hs-695-T細胞、H82sclc細胞、H-1734細胞

A673細胞類似產(chǎn)品：：MKN1細胞、SHI-1細胞、UCW 100細胞

Mouse Colon 38細胞類似產(chǎn)品：：KTC1細胞、SNU-484細胞、MDA-231細胞

MDA-MB 231細胞類似產(chǎn)品：：HCT 116細胞、UM-UC-1細胞、HCC1806細胞

HELF細胞類似產(chǎn)品：：BAR-T細胞、MBT-2細胞、CAL-120細胞

SP2細胞類似產(chǎn)品：：CCD1095Sk細胞、SW 13細胞、HPB-ALL細胞

HPB-ALL細胞類似產(chǎn)品：：Eca 109細胞、H3396細胞、PCI-4.2細胞

EC9706:人食管癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

95D細胞類似產(chǎn)品：：OCUM-1細胞、C4-2細胞、NTHY-ORI3.1細胞

LM6細胞類似產(chǎn)品：：NFS 60細胞、NCI-H735細胞、P30-OHKUBO細胞

Panc 1細胞類似產(chǎn)品：：PA317細胞、TE5細胞、OCI-Ly01細胞

T-CAM2細胞類似產(chǎn)品：：SUM-52PE細胞、Clone Y1細胞、H1993細胞

UM-RC-2細胞類似產(chǎn)品：：PNEC30細胞、B95.8細胞、Hs832T細胞

SKNBE-1細胞類似產(chǎn)品：：SKOV-433細胞、BC3H-1細胞、JS1細胞

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