"NW38 Cells(贈送Str鑒定報告)|人黑色素瘤細胞

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

解凍細胞常見實驗問題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細胞時，發(fā)現會出現存活率低、大量細胞碎片及生長緩慢等問題，究竟是什么原因導致，我們該怎么進行解決？以下是國內外細胞培養(yǎng)專家針對解凍細胞實驗問題，總結的一些解決方案！出現低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：１)解凍過程中細胞裂解，推薦的解決方案：可預期到一定量的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠GAO，考慮到這一損失。起始濃度為１*１０(６)至１*１０(７)細胞/毫升；２)解凍過程中的問題，推薦的解決方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時間為１-５天，但這不是保存的方法。在３７℃充分解凍后應立即開始培養(yǎng)；３)對冷凍液過敏，推薦的解決方案：A.完全或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在２４小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數或在生長階段中的位置。冷凍的Zui佳條件在對數期；４)被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養(yǎng)物的年齡，推薦的解決方案：解凍Zui近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態(tài)的時間越長，存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數期。

細胞生長：貼壁

IAR 20細胞類似產品：：NG-108-15細胞、N9細胞、293 F細胞

RD 2細胞類似產品：：SACCLM細胞、PANC-10-05細胞、COLO-HSR細胞

A375mel細胞類似產品：：SKLMS-1細胞、SGC-7901細胞、JHH2細胞

H1836細胞類似產品：：H-1581細胞、MUGCHOR1細胞、GM00215A細胞

Hi5細胞類似產品：：JC細胞、SKCO1細胞、CEMx721.174.T2細胞

NW38 Cells(贈送Str鑒定報告)|人黑色素瘤細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞培養(yǎng)時分布不均勻，通常操作步驟：做細胞生物學實驗，細胞鋪板大概是我們Zui常見的一個實驗。但有時候鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿。下面為大家分享幾點經驗。盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤洗一遍（25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細胞消化較為分散。如果不夠，延長消化時間。96孔板一般以100微升每孔接種，直接用100微升移液器吸取細胞懸液，沿孔壁（稍離開一點孔底即可，不要離底太GAO）直接接入，移液器不需完全打到Zui大，輕輕按下即可，每鋪完一行換一次槍頭同時輕輕混勻細胞懸液。都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強或次數太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉（逆時針效果不HAO），依次敲擊剩余三個邊，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱。6孔板、12孔板或24孔板，可采用將每個孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動浸潤整個孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔依此類推，這樣整個孔底都是濕潤的，細胞懸液會平鋪在整個孔底，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個方法就是有點慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒有96孔板HAO掌握，效果沒有96孔板HAO。培養(yǎng)瓶里面加HAO細胞以后(比如傳代HAO/分HAO細胞以后)，先順時針搖晃3次，馬上逆時針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復延X軸Y軸分別水平搖動3次。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

CAL-39細胞類似產品：：B16 subline B78細胞、EA.hy 926細胞、MC-3T3-E1細胞

NCI-SNU-423細胞類似產品：：CNE2細胞、JKT-1細胞、PMVEC細胞

HS 1.Tes細胞類似產品：：MCFs細胞、NCI-747細胞、NCI-H-69細胞

NOZC-1細胞類似產品：：F442A細胞、MFE-280細胞、Hs 636.T細胞

HuH-28細胞類似產品：：MCCAR細胞、Hs934T細胞、Jurkat, Clone E6-1細胞

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

NW38 Cells(贈送Str鑒定報告)|人黑色素瘤細胞

細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分

NTERA2細胞類似產品：：NBL-4細胞、NK-92 MI細胞、SW 1353細胞

SKBr3細胞類似產品：：Hs-281-T細胞、HFTF細胞、OAW 42細胞

LU-65M細胞類似產品：：OE19細胞、LL/2細胞、NCIH1436細胞

C-28/I2細胞類似產品：：C-32細胞、L-5178-Y-R細胞、BNCL-2細胞

HeLa S3細胞類似產品：：NCI-H82細胞、H676B細胞、Mink細胞

NCI-H1666細胞類似產品：：Mouse Bladder Tumor line-2細胞、MDA-MB-435 S細胞、GM02131細胞

細胞凍存的步驟：１)選擇處于對數生長期的細胞，在凍存前一天ZuiHAO換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為５×１０６～１×１０７/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇；３)將分裝上述細胞懸液于２ml凍存管中，每管０.２５ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記HAO細胞名稱和凍存日期，同時作HAO登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數)；４)將裝HAO細胞的凍存管放到凍存盒中，-８０℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-８０℃冰箱過夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后轉到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，ZuiHAO取出一只凍存管細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。

細胞傳代培養(yǎng)實驗：體外培養(yǎng)的原代細胞或細胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代，以便獲得穩(wěn)定的細胞株或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細胞形成單層匯合以后，由于密度過大生存空間不足而引起營養(yǎng)枯竭，將培養(yǎng)的細胞分散，從容器中取出，以１:２或１:３以上的比率轉移到另外的容器中進行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)；細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增３～６次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數/１００個細胞。一般細胞分裂指數介于０.２％～０.５％，腫瘤細胞可達３～５％；細胞接種２～３天分裂增殖旺盛，是活力ZuiHAO時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。實驗步驟：１.將長成的培養(yǎng)細胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出，在超凈工作臺中倒掉瓶內的培養(yǎng)液，加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜)，靜置５～１０分鐘。２.在倒置鏡下觀察被消化的細胞，如果細胞變圓，相互之間不再連接成片，這時應立即在超凈臺中將消化液倒掉，加入３～５ml新鮮培養(yǎng)液，吹打，制成細胞懸液。３.將細胞懸液吸出２ml左右，加到另一個培養(yǎng)瓶中并向每個瓶中分別加３ml左右培養(yǎng)液，蓋HAO瓶塞，送回二氧化碳培養(yǎng)箱中，繼續(xù)進行培養(yǎng)。一般情況，傳代后的細胞在２小時左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上，２～４天就可在瓶內形成單層，需要再次進行傳代。

NCIH2110細胞類似產品：：CL1.0細胞、SK-N-BE(1)細胞、LA 4細胞

Vero-E6細胞類似產品：：LS-513細胞、KMH-2細胞、PSN1細胞

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Panc-327細胞類似產品：：HCEC-12細胞、SN12C細胞、SNU-C2B細胞

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293T細胞類似產品：：CMT-64細胞、HL-60 clone15細胞、SMA560細胞

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BE(2)C細胞類似產品：：SUM 149PT細胞、NT2/D1細胞、BALB/c 3T3 clone A31細胞

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NW38 Cells(贈送Str鑒定報告)|人黑色素瘤細胞

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JHH7細胞類似產品：：TE354.T細胞、GM03190細胞、WERI-Rb-1細胞

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Uhth-74細胞類似產品：：HOS (TE85, Clone F5)細胞、P30-OHK細胞、OSKM-1細胞

MES 13細胞類似產品：：MCA38細胞、HLEB-3細胞、SUM 149PT細胞

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L1210細胞類似產品：：HCA-7細胞、SVG p12細胞、TE9細胞

Uhth-74細胞類似產品：：HOS (TE85, Clone F5)細胞、P30-OHK細胞、OSKM-1細胞

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PC 61細胞類似產品：：CCF-STTG1細胞、Huh-7細胞、H-524細胞

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HOP 92細胞類似產品：：WiDr/S細胞、624mel細胞、DI-TNC1細胞

DoTc2細胞類似產品：：Hs 688(A).T細胞、FU-OV-1細胞、MV4:11細胞

H23細胞類似產品：：EC-GI細胞、HUSMC細胞、2T細胞

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W256細胞類似產品：：HUC細胞、SNU-739細胞、SKMES1細胞

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NGP細胞類似產品：：CEM-C1細胞、K299細胞、MRC-9細胞

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ZR751細胞類似產品：：PK (15)細胞、DI TNC1細胞、CHP-212細胞

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GalK1細胞類似產品：：CaEs17細胞、T/G HA VSMC細胞、MB-49細胞

ZR751細胞類似產品：：PK (15)細胞、DI TNC1細胞、CHP-212細胞

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KY70細胞類似產品：：MC3T3-E1 Subclone 4細胞、SNU398細胞、Malme-3M細胞

GM05384細胞類似產品：：RWPE1細胞、MCF10-A細胞、SW403細胞

G 401細胞類似產品：：PC-9細胞、HO8910細胞、HEB細胞

NCI-460細胞類似產品：：CAL12T細胞、GFP-Olig2細胞、MKN-7細胞

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NW38 Cells(贈送Str鑒定報告)|人黑色素瘤細胞

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