Cayman的白蛋白(人)ELISA試劑盒是一種競爭性檢測方法,可用于定量血漿、血清和尿液中的人白蛋白。該檢測使用兩種標準:用于血漿和血清測量的血清白蛋白,以及用于尿液測量的從人類尿液中純化的白蛋白。該測定的范圍為7.8-1000ng/ml,血清和尿液中的中點(50%B/B0)分別為90-130ng/ml和50-80ng/ml,血清中的靈敏度(80%B/B0)約為25ng/ml,尿液中的靈敏度約為15ng/ml。
需要但未提供:請下載試劑盒小冊子,以驗證此檢測是否需要超純水(Milli-Q或同等產(chǎn)品)或任何其他成分。
警告:本品不適用于人類或獸醫(yī)。
檢測原理:
艾美捷Cayman的白蛋白(人)ELISA試劑盒(#501760),基于天然白蛋白與白蛋白-辣根過氧化物酶(HRP)綴合物(白蛋白-HRP追蹤器)對限量的白蛋白單克隆抗體的爭奪。由于白蛋白-HRP追蹤器的濃度保持恒定,而天然白蛋白的濃度變化,能夠與白蛋白單克隆抗體結合的白蛋白-HRP追蹤器的量將與孔中天然白蛋白的濃度成反比。這種抗體-白蛋白復合物與之前固定在孔中的山羊抗小鼠IgG結合。然后對板進行洗滌以去除任何未結合的試劑,并向孔中加入TMB底物溶液(其中含有HRP的底物)。這一酶促反應的產(chǎn)物具有明顯的黃色,并且在450納米處吸收強烈。通過分光光度法測定的這種顏色的強度與結合在孔中的白蛋白-HRP追蹤器的量成正比,這又與孵化期間孔中存在的游離白蛋白的量成反比,如方程式所述:
吸光度[結合白蛋白-HRP追蹤器]c1/[白蛋白]Aschematic
過程示意圖見圖1。
ELISA示意圖
計算:
數(shù)據(jù)準備
以下是在圖形分析前推薦的數(shù)據(jù)準備程序。
注意:如果板讀數(shù)器沒有從其他板的吸光度讀數(shù)中減去Blk孔的吸光度讀數(shù),請確保現(xiàn)在這樣做。
1. 平均NSB孔的吸光度讀數(shù)。
2. 平均B?孔的吸光度讀數(shù)。
3. 從B?平均值中減去NSB平均值。這是校正后的B?或校正后的最大結合。
4. 計算剩余孔的B/B?(樣本或標準結合/最大結合)。為此,從S1吸光度中減去平均NSB吸光度,并除以校正后的B?(來自步驟3)。對S2-S8和所有樣本孔重復此操作。(要獲得邏輯四參數(shù)擬合的%B/B?,將這些值乘以100。)
注意:TA值不用于標準曲線計算。相反,它們被用作診斷工具。TA孔的低吸光度或無吸光度可能表明酶-底物系統(tǒng)存在故障。
特征:
測量人血漿、血清和尿液中的白蛋白
檢測24個樣本,一式三份,36個樣本,共兩份
將血清白蛋白水平降至25 ng/ml,尿液白蛋白水平降至15 ng/ml
快速測定;在三小時內得到結果
白蛋白(人)ELISA試劑盒文獻參考:
1.Quinlan,G.J.,Martin,G.S.,and Evans,T.W.Albumin:Biochemical propertiesand therapeutic potential.Hepatology 41(6),1211-1219(2005).
2.Speeckaert,M.M.,Speeckaert,R.,Van De Voorde,L.,et al.Immunochemicallyunreactive albumin in urine:Fiction or reality?Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.48(2),87-96(2011).
3.Carvalho,J.R.and Machado,M.V.New insights about albumin and liverdisease.Ann.Hepatol.17(4),547-560(2018).
4.Corti,M.C.,Guralnik,J.M.,Salive,M.E.et al.Serum albumin level andphysical disability as predictorsof mortality in older persons.JAMA 272(13),1036-1042(1994).
https://www.amyjet.com/products/701640-96.shtml