Cayman的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）比色活性測(cè)定試劑盒提供了一種方便的方法，用于在血清、血漿、組織樣本和細(xì)胞裂解液中檢測(cè)AST活性。通過監(jiān)測(cè)與蘋果酸脫氫酶（MDH）耦聯(lián)的反應(yīng)系統(tǒng)中NADH氧化的速率來測(cè)量AST活性。NADH氧化成NAD+伴隨著在340納米處吸光度的降低。在AST活性速率成為限制性條件的情況下，吸光度降低的速率與樣本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脫氫酶（LDH）以防止血清中通常存在的內(nèi)源性丙酮酸的干擾。
需要但未提供的：請(qǐng)下載試劑盒手冊(cè)，以驗(yàn)證是否需要超純水（Milli-Q或等效物）或該測(cè)定的其他任何組分。
警告：本品不適用于人類或獸醫(yī)用途。
測(cè)定方案：
艾美捷Cayman的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶比色活性測(cè)定試劑盒（#701640-96），用于在血清、血漿、組織樣本和細(xì)胞裂解液中檢測(cè)AST活性。通過監(jiān)測(cè)與蘋果酸脫氫酶（MDH）耦聯(lián)的反應(yīng)系統(tǒng)中NADH氧化的速率來測(cè)量AST活性。NADH氧化成NAD?伴隨著在340納米處吸光度的降低。在AST活性速率成為限制性條件的情況下，吸光度降低的速率與樣本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脫氫酶（LDH）以防止血清中通常存在的內(nèi)源性丙酮酸的干擾。
樣本準(zhǔn)備：
血漿
通常，正常人血漿中的AST濃度范圍為8-40 U/L。
1. 使用肝素或檸檬酸等抗凝劑采集血液。
2. 在4℃下，以700-1000g的速度離心血液10分鐘。用移液管取上層黃色血漿層，不要擾動(dòng)白色纖維層。將血漿存放在冰上。如果不在同一天進(jìn)行測(cè)定，存放在-80℃。避免反復(fù)凍融。
3. 血漿在測(cè)定前不需要稀釋。
血清
通常，正常人血清中的AST濃度范圍為8-40 U/L。
1. 采集血液時(shí)不使用肝素或檸檬酸等抗凝劑。
2. 讓血液在25℃下凝固30分鐘。
3. 在4℃下，以2000g的速度離心血液15分鐘。用移液管取上層黃色血清層，不要擾動(dòng)白色纖維層。將血清存放在冰上。如果不在同一天進(jìn)行測(cè)定，存放在-80℃。避免反復(fù)凍融。
4. 血清在測(cè)定前不需要稀釋。
組織勻漿
1. 在解剖前，用pH 7.4的PBS溶液沖洗組織，以去除任何紅細(xì)胞和凝塊。
2. 每克組織用5-10毫升冷緩沖液（例如，100 mM Tris，pH 7.8）勻漿。
3. 在4℃下，以10000g的速度離心10分鐘。
4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天進(jìn)行測(cè)定，將樣本存放在-20℃。
注意：如果340納米波長(zhǎng)處吸光度降低的速率（A340）大于0.4吸光單位/分鐘，需要用測(cè)定緩沖液（1X）稀釋樣本以落在測(cè)定的線性范圍內(nèi)。
細(xì)胞裂解液
1. 通過離心（例如，在4℃下，以1000-2000g的速度離心10分鐘）收集細(xì)胞（約5×10^5個(gè)）。對(duì)于貼壁細(xì)胞，使用橡膠警察而不是蛋白水解酶。
2. 在0.5-1.0毫升冷緩沖液（例如，100 mM Tris，pH 7.5，1 mM EDTA）中勻漿細(xì)胞沉淀物。
3. 在4℃下，以10000g的速度離心10分鐘。
4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天進(jìn)行測(cè)定，將樣本冷凍在-80℃。
注意：如果A340降低的速率大于0.4吸光單位/分鐘，需要用測(cè)定緩沖液（1X）稀釋樣本以落在測(cè)定的線性范圍內(nèi)。
添加和恢復(fù)
人血清樣本中添加了AST，并使用天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶比色活性測(cè)定試劑盒進(jìn)行分析。結(jié)果如下。
圖. 人血清中的添加和恢復(fù)
天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶比色活性測(cè)定試劑盒文獻(xiàn)參考：
1.Kirsch,J.F,Eichele,G,Ford,G.C,et al.Mechanism ofaction of aspartateaminotransferase proposed on the basis of its spatial structure.J.Mol.Biol.174(3),497-525(1984).
2.Pratt,DS.and Kaplan,M.M.Evaluation of abnormal liver-enzyme results inasymptomatic patients.N.Engl.J.Med.342(17),1266-1271(2000).
3.Okanoue,T,Ebise,H,Kai,T,et al.A simple scoring system using type IVcollagen 7S and aspartate aminotransferase for diagnosing nonalcoholicsteatohepatitis and related fibrosis.J.Gastroenterol.53(1),129-139(2018).
4.Unalp-Arida,A.and Ruhl,C.E.Liver fibrosis scores predict liver diseasemortality in the United States population.Hepatology 66(1),84-95(2018).
5.Xiao,G.,Yang,J,and Yan,L.Comparisonof diagnostic accuracy of aspartateaminotransferase to platelet ratio index and fibrosis-4 index for detectingliver fibrosis in adult patients with chronic hepatitis B virus infection:Asystemic review and meta-analysis.Hepatology 61(1),292-302(2015).
6.Torruellas,C,French,S.W,Medici,V.Diagnosis of alcoholic liver disease.World J.Gastroenterol 20(33).11684-11699(2014).
https://www.amyjet.com/products/701640-96.shtml