Cayman的堿性磷酸酶（ALP）比色活性測(cè)定試劑盒提供了一種方便的方法，用于在血清、血漿、組織樣本和細(xì)胞裂解液中測(cè)量ALP活性，檢測(cè)限為0.5 U/L。ALP活性的測(cè)量是通過(guò)監(jiān)測(cè)色原性底物對(duì)硝基苯磷酸酯（pNPP）的脫磷酸作用來(lái)完成的。在第一步中，ALP使pNPP脫磷酸生成對(duì)硝基苯酚。在第二步中，酚羥基在堿性條件下被脫質(zhì)子，生成對(duì)硝基苯酚鹽，產(chǎn)生強(qiáng)烈的黃色，可以使用405納米處的吸光度來(lái)測(cè)量。在ALP活性成為速率限制步驟的情況下，405納米處吸光度的增加與樣本中的ALP活性直接成比例。
需要但未提供的：請(qǐng)下載試劑盒手冊(cè)，以驗(yàn)證是否需要超純水（Milli-Q或等效物）或該測(cè)定的其他任何組分。
警告：本品不適用于人類或獸醫(yī)用途。
測(cè)定方案：
艾美捷Cayman的堿性磷酸酶比色活性檢測(cè)試劑盒（#701710-480），用于在血清、血漿、組織樣本和細(xì)胞裂解液中測(cè)量ALP活性，檢測(cè)限為0.5 U/L。ALP活性的測(cè)量是通過(guò)監(jiān)測(cè)色原性底物對(duì)硝基苯磷酸酯（pNPP）的脫磷酸作用來(lái)完成的。在第一步中，ALP使pNPP脫磷酸生成對(duì)硝基苯酚。在第二步中，酚羥基在堿性條件下被脫質(zhì)子，生成對(duì)硝基苯酚鹽，產(chǎn)生強(qiáng)烈的黃色，可以使用405納米處的吸光度來(lái)測(cè)量。在ALP活性成為速率限制步驟的情況下，405納米處吸光度的增加與樣本中的ALP活性直接成比例。
預(yù)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
試劑準(zhǔn)備
1. ALP測(cè)定緩沖液
此瓶含有30毫升的ALP測(cè)定緩沖液（項(xiàng)目編號(hào)400083），可直接使用。
2. ALP底物
此瓶含有作為ALP底物的pNPP片劑（項(xiàng)目編號(hào)400112）。將兩片片劑溶解在2.7毫升ALP測(cè)定緩沖液中。這是足夠測(cè)定一個(gè)96孔板的底物體積。注意：為了防止污染片劑，避免用手直接接觸片劑。保護(hù)ALP底物溶液免受光線照射。它在室溫下穩(wěn)定四小時(shí)。
3. ALP陽(yáng)性對(duì)照
此瓶含有10微升的牛ALP作為陽(yáng)性對(duì)照。將4微升的ALP陽(yáng)性對(duì)照（項(xiàng)目編號(hào)400113）與396微升的ALP測(cè)定緩沖液混合，得到ALP陽(yáng)性對(duì)照（100X）庫(kù)存溶液。進(jìn)一步將ALP陽(yáng)性對(duì)照（100X）庫(kù)存溶液稀釋，將4微升的ALP陽(yáng)性對(duì)照（100X）與396微升的ALP測(cè)定緩沖液混合，得到ALP陽(yáng)性對(duì)照（1X）工作溶液。ALP陽(yáng)性對(duì)照（1X）工作溶液在室溫下穩(wěn)定四小時(shí)。兩種稀釋的ALP陽(yáng)性對(duì)照酶庫(kù)存在4℃下至少穩(wěn)定72小時(shí)。
4. ALP停止溶液
此瓶含有2M氫氧化鈉（NaOH）溶液。將2.5毫升的ALP停止溶液（項(xiàng)目編號(hào)400114）與7.5毫升的純水混合，最終濃度為500mM。稀釋的ALP停止溶液在室溫下至少穩(wěn)定一個(gè)月。
添加和恢復(fù)
測(cè)定緩沖液、小鼠肝組織提取物和人血清被添加了ALP，并使用ALP比色活性測(cè)定試劑盒進(jìn)行分析。通過(guò)與在緩沖液中測(cè)量的相同添加物的活性比較，計(jì)算了血漿和組織提取物中ALP的百分比恢復(fù)。結(jié)果如下。誤差條代表ALP活性多次測(cè)量之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
圖. 小鼠肝組織提取物和人血清中的添加和恢復(fù)。
堿性磷酸酶比色活性檢測(cè)試劑盒文獻(xiàn)參考：
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https://www.amyjet.com/products/701710-480.shtml