GSTp檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），用于定量檢測(cè)倉(cāng)鼠（CHO）細(xì)胞樣本中的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶π（GSTp）。僅供研究使用，不得用于診斷程序。
艾美捷谷胱甘肽(CHO)GSTp ELISA試劑盒【#41-GSTHA-E01】檢測(cè)原理：
在此檢測(cè)中，樣本中的GSTp與已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗GSTp抗體發(fā)生反應(yīng)。經(jīng)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入檢測(cè)抗體，即生物素偶聯(lián)的抗GSTp抗體，形成復(fù)合物。洗滌后，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的鏈霉親和素，形成復(fù)合物。再經(jīng)洗滌后，通過(guò)加入顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定復(fù)合物。結(jié)合的酶量與樣本中GSTp的濃度成正比；因此，450 nm處的吸光度是測(cè)試樣本中GSTp濃度的量度。可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（由標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建）來(lái)估算測(cè)試樣本中GSTp的量，并根據(jù)樣本稀釋情況進(jìn)行校正。
谷胱甘肽(CHO)GSTp ELISA試劑盒組成：
試劑盒及其組分的有效期在包裝標(biāo)簽上注明。如果按照本試劑盒說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存和使用，所有組分在有效期內(nèi)應(yīng)保持穩(wěn)定。
所需材料（未提供）：
精密移液管（2 µL至1000 µL），用于制備和分裝稀釋液
試管
噴壺或微孔板清洗/吸引器
蒸餾水或去離子水
能在450 nm處讀數(shù)的微孔板讀數(shù)儀
用于制備試劑和緩沖液溶液的各種玻璃器皿
用于樣本收集的離心機(jī)
計(jì)時(shí)器
微孔板振蕩器
樣本稀釋?zhuān)?/p>
檢測(cè)要求每個(gè)測(cè)試樣本在使用前進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，所有樣本都應(yīng)進(jìn)行雙份檢測(cè)。推薦的稀釋倍數(shù)僅為建議。稀釋倍數(shù)應(yīng)基于未知樣本的預(yù)期濃度，使得稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，強(qiáng)烈建議對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋。在使用前立即稀釋樣本。
CHO培養(yǎng)提取樣本——推薦起始稀釋倍數(shù)為1:20。要制備樣本的1:20稀釋液，將15 µL樣本轉(zhuǎn)移至285 µL的1X稀釋液中。充分混合。
結(jié)果計(jì)算：
從所有孔的測(cè)試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。
對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)讀數(shù)取平均值，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線(xiàn)擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)處理數(shù)據(jù)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線(xiàn)擬合；然而，它們將提供數(shù)據(jù)的擬合精度較低。
從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上估算測(cè)試樣本值。根據(jù)稀釋因子進(jìn)行校正，以得出原始樣本中GSTp的濃度。
https://www.amyjet.com/products/ALP-41-GSTHA-E01.shtml