產(chǎn)品概述:Taq DNA聚合酶,是一種耐熱的DNA聚合酶,來(lái)源于水生棲熱菌(Thermus aquaticusYT-1),該酶具有5’→3’的聚合酶活性和雙鏈特異性5’→3’的核酸外切酶活性。
該酶使用化學(xué)修飾基團(tuán)封閉了低溫以及室溫的酶活。經(jīng)過(guò)95℃熱激活后,化學(xué)修飾基團(tuán)脫落釋放酶活。在擴(kuò)增體系配制至PCR擴(kuò)增前,不會(huì)產(chǎn)生由于引物錯(cuò)誤配對(duì)而形成的非特異性擴(kuò)增,程度降低非特異擴(kuò)增和引物二聚體的形成,提高擴(kuò)增的靈敏度和特異性。該產(chǎn)品采用經(jīng)過(guò)特殊優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,與熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶(化學(xué)修飾)制成預(yù)混試劑,限度保證了儲(chǔ)存過(guò)程中酶的穩(wěn)定性,配置體系前只用加入引物模板以及水,大大簡(jiǎn)化了配制步驟。
本品通用性強(qiáng),適用于終點(diǎn)PCR、染料及探針?lè)╭PCR。
運(yùn)輸與保存方法:≤0℃運(yùn)輸;-25~-15℃保存。
單位定義:用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,74℃,30 min內(nèi),攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
•核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè):4μg pUC19 DNA加入本試劑中,在37℃下孵育4 h,DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
•5 kbλDNA擴(kuò)增檢測(cè):以5 ngλDNA為模板擴(kuò)增25個(gè)循環(huán)后,瓊脂糖凝膠電泳,可見(jiàn)有單一的特異性5 kb條帶。
•核酸外切酶檢測(cè):20μl反應(yīng)體系體系中加入1μM 5’-FAM標(biāo)記的寡核苷酸,37℃孵育30min,無(wú)降解信號(hào)。
•熱失活:無(wú)
•儲(chǔ)存穩(wěn)定性:將本試劑反復(fù)凍融50次,擴(kuò)增性能無(wú)下降。