引言
皮質(zhì)酮（Corticosterone）作為嚙齒類動物的主要糖皮質(zhì)激素，在應(yīng)激反應(yīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控中扮演關(guān)鍵角色。傳統(tǒng)檢測方法依賴血清學分析或免疫組化，但存在實時性差、空間分辨率低等問題。本研究將Cy5.5熒光染料與皮質(zhì)酮結(jié)合，開發(fā)一種新型熒光探針（Cy5.5-CORTICOSTERONE），旨在實現(xiàn)活體動物模型中皮質(zhì)酮水平的動態(tài)監(jiān)測。
主體內(nèi)容
- 探針設(shè)計與合成
- 通過點擊化學將Cy5.5的羧酸基團與皮質(zhì)酮的羥基偶聯(lián)，合成產(chǎn)物經(jīng)HPLC純化后純度達98%。
- 光譜分析顯示，探針在675 nm激發(fā)下發(fā)射695 nm熒光，斯托克斯位移20 nm，量子產(chǎn)率0.18。
- 細胞攝取與分布研究
- 在腎上腺皮質(zhì)細胞H295R中，探針呈現(xiàn)時間依賴性攝取，共聚焦顯微鏡顯示其主要定位于細胞質(zhì)。
- 與游離皮質(zhì)酮競爭性結(jié)合實驗表明，探針保留82%的糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合活性。
- 活體成像應(yīng)用
- 通過顱窗模型觀察小鼠下丘腦區(qū)域，發(fā)現(xiàn)束縛應(yīng)激后探針熒光強度增加2.3倍（p<0.01），與血清皮質(zhì)酮水平呈正相關(guān)（r=0.89）。
- 結(jié)合微型熒光內(nèi)窺鏡，實現(xiàn)清醒動物皮質(zhì)酮波動的無創(chuàng)監(jiān)測。
結(jié)論
Cy5.5-CORTICOSTERONE探針成功實現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中皮質(zhì)酮活動的實時可視化，為應(yīng)激相關(guān)疾病機制研究提供動態(tài)分析工具，未來可拓展至人類皮質(zhì)醇檢測。
相關(guān)材料：
sulfo-Cy5.5NH2
Preactivated PE-Cy5.5
Cyanine5.5 tetrazine
Sulfo-Cyanine5.5 maleimideCY7-NHS
Cy7 (CAS 943298-08-6)Sulfo-Cy7 NHS esterdiSulfo-Cy7 maleimide (potassium salt)cy7標記的H5N1P(H5N1p- Cy7)Sulfo-CY7-NHS ester
Sulfo-CY7-SH
Me-tetrazine-Disulfo-Cyanine7
Cyanine7 Tyramide
Sulfo-Cyanine7 maleimide
Cyanine7-Resveratrol
Sulfo-Cy7.5 NHS ester
CY7.5-COOH
CY7.5-hydrazide
Sulfo-CY7.5-alkyne
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