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Cy5.5-HTCOSC|Cy5.5-季銨化殼寡糖在基因遞送系統(tǒng)中的構(gòu)建與優(yōu)化
發(fā)布日期:2025/4/18 10:18:54發(fā)布人:重慶渝偲醫(yī)藥科技有限公司

引言
基因遞送系統(tǒng)需高效、安全地將基因遞送至靶細(xì)胞。季銨化殼寡糖(HTCOSC)作為陽離子多糖,可通過靜電作用結(jié)合DNA,形成納米復(fù)合物。Cy5.5標(biāo)記的HTCOSC(Cy5.5-HTCOSC)可實時追蹤基因遞送過程,優(yōu)化遞送效率。

主體內(nèi)容

  1. 基因遞送系統(tǒng)構(gòu)建
    1. 復(fù)合物制備Cy5.5-HTCOSC與pEGFP-N1質(zhì)粒(DNA)通過靜電作用形成納米復(fù)合物,粒徑約150 nm,ζ電位+28 mV。
    2. 穩(wěn)定性分析:在含10%血清的培養(yǎng)基中,復(fù)合物粒徑48小時內(nèi)增加<10%,顯示良好的穩(wěn)定性。
  2. 體外轉(zhuǎn)染實驗
    1. 細(xì)胞攝取HeLa細(xì)胞對Cy5.5-HTCOSC/DNA復(fù)合物的攝取量是未修飾組的4.1倍。
    2. 轉(zhuǎn)染效率:復(fù)合物處理48小時后,綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)陽性細(xì)胞率達(dá)65%,顯著高于未修飾組(28%)。
    3. 機(jī)制:共聚焦顯微鏡顯示復(fù)合物通過網(wǎng)格蛋白依賴的內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,并在溶酶體中逃逸。
  3. 體內(nèi)基因遞送研究
    1. 組織分布:靜脈注射復(fù)合物至小鼠后,肝臟和脾臟的熒光信號強(qiáng)度分別是肺的3.2倍和2.5倍,提示復(fù)合物在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的富集。
    2. 基因表達(dá):通過qPCR檢測,肝臟中GFP mRNA水平是未修飾組的5.8倍,表明復(fù)合物成功遞送基因至靶器官。

結(jié)論
Cy5.5-HTCOSC通過熒光成像引導(dǎo)基因遞送,顯著提升了轉(zhuǎn)染效率和靶向性。未來可探索其在腫瘤基因治療或遺傳病治療中的應(yīng)用。

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