病毒DNA/RNA提取試劑盒
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：病毒DNA/RNA提取試劑盒
英文名稱：Viral DNA/RNA Acid Extraction Kit
【包裝規(guī)格】 50T/盒
【預期用途】
本產(chǎn)品適合于從血清、血漿、牛奶、體液、培養(yǎng)液、組織勻漿液、拭子等樣品中提取病毒RNA或DNA。試劑盒基于硅膠柱純化技術，提取過程中無需使用有毒的酚氯仿抽提，也無需進行耗時的醇類沉淀。獲得的DNA/RNA可直接用于RT-PCR、PCR、Northern雜交、以及各種病毒檢測等。
【主要組成成份】
【儲存條件及有效期】
本產(chǎn)品部分組份保存于室溫(15-25℃)，有效期12個月，長期保存時需置于2-8℃；蛋白酶K保存于2-8℃,長期保存時需置于-20℃，有效期12個月。（收到試劑盒后將蛋白酶K保存于-20℃）
【注意事項】
- 自備無水乙醇(96-100%)、自備離心管；裂解液避免長期與空氣接觸，易揮發(fā)；
- 為避免其他核酸的污染，必須使用不含DNA和RNA的離心管、吸管、槍頭、試劑和手套，操作人員須戴口罩；
- 避免反復凍融蛋白酶 K，會影響其活性.
【操作步驟】
- 轉(zhuǎn)移20 µl 蛋白酶K至1.5ml離心管中。
- 轉(zhuǎn)移200 µl樣品,如血清、血漿、尿液、培養(yǎng)液上清、或其它無細胞體液至裝有蛋白酶K的離心管中,震蕩混勻5s。若樣品不足200µl，用Buffer PBS或無核酶水補足。（咽/口腔拭子，或固體組織樣品先用Buffer PBS浸泡或勻漿后,離心取上清進行操作。）
- 加入250µl 裂解液 至步驟2的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置3-5min。
- 加入250µl無水乙醇 至步驟3的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置1min。
- 把 純化柱 裝在2ml收集管中，轉(zhuǎn)移步驟4的混合液至純化柱中。12000rpm離心1min。
- 倒棄濾液把純化柱裝回收集管中,加入650 µl 洗滌液 至純化柱中,12000rpm離心1min。
- 按照步驟6重復一次。
- 倒棄濾液把純化柱套回收集管,12000rpm離心空柱2min甩干純化柱。
- 將純化柱轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管,加入50µl 洗脫液至純化柱的膜中央，室溫靜置1min，12000rpm離心1min。離心管中即為所提取的樣品DNA/RNA。
【常見問題】
- 純化柱堵塞
- 樣品用量太多：處理動物抗凝血液時，樣品量控制在100-150µl。盡量使用無細胞的樣品，如血漿、血清、組織勻漿液的上清等。
- 蛋白酶 K活性下降：重新制備蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必須保存于-20℃，避免反復凍融。蛋白酶 K與裂解液不能預先混合。
- 樣品含固體顆粒：在第4步加入乙醇前，12000rpm離心3min去除未消化的雜質(zhì)，轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管后再加入乙醇。
- 樣品裂解不充分：樣品與裂解液混勻不充分。重新提取，加入裂解液后先顛倒混勻3-5次，然后以最高速度渦旋讓樣品與裂解液充分混勻。
- 下游應用結(jié)果不理想
- 樣品被反復解凍： 避免反復凍溶樣品。推薦使用新鮮樣品或只解凍過一次的樣品。
- 蛋白酶K活性下降：更換蛋白酶K。使用后蛋白酶 K必須立即保存于-20℃，避免反復凍融。
- 洗脫液被污染：更換新的洗脫液或DEPC處理水。
- 乙醇殘留：柱子在洗脫前，需要空甩去除乙醇。對于敏感的應用，柱子在洗脫后，打開柱子的蓋子，放置10-15min讓乙醇徹底揮發(fā)。
- 洗脫效率：處理富含DNA的樣品時，把洗脫液預熱至55℃后再進行洗脫，有利于提高DNA得率。