IHC 抗體是什么

IHC，即免疫組織化學，是一項將免疫學與傳統(tǒng)組織化學巧妙結(jié)合的技術(shù)。它利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，來檢測和定位組織和細胞中的某些化學物質(zhì)。

免疫組織化學具有高度的敏感性和特異性。它能夠?qū)⑿螒B(tài)學改變與功能、代謝變化相結(jié)合，直接定位蛋白質(zhì)和多肽類物質(zhì)的存在。其全過程包括抗原的提取與純化、免疫動物或細胞融合制備特異性抗體及抗體純化、將顯色劑與抗體結(jié)合形成標記抗體、標本制備、免疫細胞化學反應(yīng)以及呈色反應(yīng)、最后觀察結(jié)果。

在生物醫(yī)學研究中，免疫組織化學染色有著廣泛的作用，涉及多個研究領(lǐng)域。例如，可以確定細胞類型和形態(tài)，通過標記性蛋白的特異性抗體確定細胞種類，對于在光鏡下不易辨認的細胞，可通過對胞質(zhì)內(nèi)特定蛋白實施免疫組化染色，清楚顯示細胞外形輪廓；還能辨認細胞產(chǎn)物的來源，利用細胞產(chǎn)物為抗原制備抗體，對組織細胞實施免疫組織化學染色，確定細胞產(chǎn)物來源，研究細胞分泌功能及對內(nèi)分泌腫瘤作功能分類等；可以確定細胞的分化程度，根據(jù)不同細胞表達的標志性蛋白鑒定細胞分化程度；可追蹤神經(jīng)纖維束和它的投射區(qū)，常與軸漿運輸示蹤法相結(jié)合研究神經(jīng)元之間的聯(lián)系；在臨床病理中也有諸多應(yīng)用，如鑒定病變性質(zhì)、發(fā)現(xiàn)微小病灶、探討腫瘤起源或分化表型、確定腫瘤分期、指導(dǎo)治療和預(yù)后、輔助疾病診斷和分類、尋找感染病因等。

免疫組織化學技術(shù)也有其局限性，組織細胞內(nèi)的待測物質(zhì)要有抗原性，且需要達到一定濃度才可檢出，檢出的免疫反應(yīng)陽性蛋白不能確定是細胞新合成的蛋白還是通過細胞間運輸而來的蛋白。

IHC 抗體的作用

1. 在臨床上常被用于惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷，確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位以及對某類腫瘤進行進一步的病理分型等。

IHC 抗體在臨床上具有重要作用。首先，它常被用于惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷。例如，在肺腺癌與肺鱗癌的鑒別中，TTF - 1 / P63 組合基本可以滿足鑒別需求。此外，對于一些轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤，IHC 抗體可以確定其原發(fā)部位。中科院合肥物質(zhì)科學研究院的谷紅倉研究員及其團隊開發(fā)的新方法，可根據(jù)福爾馬林固定石蠟包埋樣本的 DNA 甲基化信息來預(yù)測轉(zhuǎn)移性癌癥的原發(fā)部位，而傳統(tǒng)的 “金標準” 免疫組化（IHC）技術(shù)雖被廣泛應(yīng)用，但易受抗體質(zhì)量及人為因素影響，僅能判定 50 - 65% 的轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)部位。同時，IHC 抗體還能對某類腫瘤進行進一步的病理分型，如乳腺癌通過 ER、PR、HER - 2、Ki - 67 表達情況來細分病理分型；軟組織腫瘤也可利用多種標志進行免疫組化研究，確定其正確組織學分類。

2. 通過抗原抗體結(jié)合反應(yīng)檢測抗原和抗體，利用抗體與目標抗原相互作用的原理，可視化目標抗原在組織中的位置和表達水平。

IHC 檢測是一種利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)來檢測和定位組織和細胞中的某些化學物質(zhì)的技術(shù)。其原理是抗原與抗體特異性結(jié)合后再通過化學反應(yīng)使標記抗體顯色，從而確定組織細胞內(nèi)的抗原，并對其進行定位和定性。具體來說，先將組織或細胞中的某種化學物質(zhì)提取出來作為抗原，通過免疫動物后獲得特異性抗體，再用此抗體去探測組織或細胞中的同類抗原物質(zhì)，最后借助組織化學的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來。在操作過程中，如免疫組化（SP 法）操作步驟包括切片常規(guī)脫蠟至水、緩沖液洗、去除內(nèi)源性過氧化物酶、再次緩沖液洗、封閉非特異性背景染色、再次緩沖液洗、滴加一抗工作液、再次緩沖液洗、滴加增強子、再次緩沖液洗、滴加酶標二抗、再次緩沖液洗、滴加顯色劑、自來水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片等。多克隆抗體在免疫組織化學中應(yīng)用廣泛，常用于組織切片的染色，幫助識別和定位特定的蛋白質(zhì)，對腫瘤的分類和預(yù)后判斷具有重要作用。

常見的 IHC 抗體有哪些

1. 介紹激素與生長因子及其受體相關(guān)的 IHC 常用抗體，如 ACTH、AR、Calcitonin、C-erbB-2、EGFR、ER、beta-hCG 等。

• • ACTH（促腎上腺皮質(zhì)激素）：由垂體前葉細胞分泌，主要用于垂體腫瘤的功能性分類、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性垂體瘤的診斷和鑒別診斷。部分神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中 ACTH 染色陽性，如嗜鉻細胞瘤、類癌等。

• • AR（雄激素受體）：在前列腺癌的發(fā)生中起著重要作用，其表達與組織學分型呈一定相關(guān)性，高分化腫瘤 AR 的表達高于低分化腫瘤。AR 陽性者對抗激素及去勢治療的效果好，在睪丸、前列腺中染色陽性，也可用于乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌中雄激素水平的檢測。

• • Calcitonin（降鈣素）：是血液中能降低鈣含量的一種多肽，由甲狀腺濾泡旁細胞（C 細胞）分泌。此抗體主要用于甲狀腺 C 細胞增生、甲狀腺髓樣癌的診斷及某些神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的研究。

• • C-erbB-2（HER-2/neu）：編碼具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，在 20 - 30% 的乳腺癌病人中可檢測到過表達。此抗體主要作為判斷乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌及消化道腫瘤預(yù)后的參考指標。

• • EGFR（表皮生長因子受體）：是分子量為 170kDa 的膜蛋白，表達于多種正常組織。乳腺癌病人 EGFR 的過度表達預(yù)示生存期短、激素療效差；對胃癌病人表明預(yù)后差，并可指導(dǎo)結(jié)直腸癌靶向藥物西妥昔單抗的治療。

• • ER（雌激素受體）：是乳腺生長和分化的重要調(diào)節(jié)因子，乳腺癌組織中雌激素受體是判斷預(yù)后和預(yù)測內(nèi)分泌治療敏感性的重要參數(shù)，存在于正常子宮內(nèi)膜、平滑肌細胞及正常乳腺的上皮細胞。

• • beta-hCG（絨毛膜促性腺激素 β 亞基）：由胎盤合體滋養(yǎng)層細胞產(chǎn)生，正常妊娠的絨毛滋養(yǎng)細胞染色陽性，可用于絨毛膜上皮癌、葡萄胎和惡性葡萄胎的診斷，可檢測滋養(yǎng)層細胞來源的腫瘤和生殖細胞腫瘤，異位表達提示可能為腫瘤浸潤或轉(zhuǎn)移行為。

2. 細數(shù)肺癌療效預(yù)測標志物中關(guān)鍵的 IHC 抗體，包括 EGFR、PD-1/PD-L1、C-MET、CD56、CD20、CD163 等。

• • EGFR：在 NSCLC 治療方面，表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑是攜帶 EGFR 突變基因的晚期非小細胞肺癌患者的優(yōu)先選擇。針對 EGFR 的免疫組化檢測對 NSCLC 治療和預(yù)后評估具有重要意義。

• • PD-1/PD-L1：用抗 PD-1 或抗 PD-L1 抗體進行免疫治療可釋放先天免疫系統(tǒng)的殺傷作用，對腫瘤生長做出免疫反應(yīng)。但目前 PD-1 和 PD-L1 免疫組化檢測存在產(chǎn)品及檢測方法未標準化的問題。

• • C-MET：基因?qū)儆谠┗?，在肺癌中易被檢出。C-MET 與肺癌臨床分期、分化程度以及肺癌患者預(yù)后不良相關(guān)，可根據(jù)過表達方式明確肺癌的分化程度和分期，還可作為治療靶點。

• • CD56：是表達于 NK 細胞和小部分活化的 T 淋巴細胞及神經(jīng)外胚層起源的細胞的分子抗體，為肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤首選的特異性標志物。

• • CD20：表達于除漿細胞外的發(fā)育分化各階段的 B 細胞表面，B 細胞被認為是肺癌患者癌癥進展延遲、治療反應(yīng)改善和生存延長的陽性預(yù)測因子。

• • CD163：肺癌腫瘤微環(huán)境中，腫瘤相關(guān)巨噬細胞根據(jù)功能可分為 M1 型和 M2 型，以免疫抑制巨噬細胞（M2）為主，M2 巨噬細胞可促進腫瘤發(fā)展，CD163 是肺癌巨噬細胞極化 M2 型標志物。

3. Cell Marque IHC 抗體介紹，包括兔抗糜蛋白酶多克隆抗體、抗胰蛋白酶兔多克隆抗體、促腎上腺皮質(zhì)激素兔多克隆抗體等。

• • A-1 - 兔抗糜蛋白酶多克隆抗體：α-1 抗糜蛋白酶可抑制絲氨酸蛋白酶，此抗體可用于鑒定組織細胞及其衍生腫瘤中 α-1 抗胰蛋白酶的存在。

• • A-1 - 抗胰蛋白酶兔多克隆抗體：α-1 - 抗胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶超家族中的蛋白酶抑制劑，可用于檢測肝臟病變和組織細胞腫瘤中 α-1 - 抗蛋白酶的積聚。

• • 促腎上腺皮質(zhì)激素兔多克隆抗體：促腎上腺皮質(zhì)激素由垂體前葉合成和分泌，此抗體可用于垂體腫瘤性和非腫瘤性疾病的研究。

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