過氧化氫（H2O2）檢測試劑盒(硫酸鈦比色法)http://www.yajimall.com/
一、產品簡介：
過氧化氫(H2O2)是生物體內最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產生，由CAT和POD等催化降解，H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉化的樞紐。生命體內積累的H2O2是由一些氧化物催化超氧陰離子發(fā)生氧化還原反應而形成，H2O2相對超氧陰離子性質穩(wěn)定，但其存在可以直接或間接導致細胞膜脂質過氧化損害，加速細胞的衰老和解體，H2O2也是許多氧化應激反應中的關鍵調節(jié)因子。
雅吉生物過氧化氫(H2O2檢測試劑盒(硫酸鈦比色法)其檢測原理是H2O2與硫酸鈦反應生成的過氧化物-鈦復合物黃色沉淀，溶解于強酸中，其黃色深淺與過氧化氫濃度在一定范圍內呈線性關系，可通過比色法檢測412nm處吸光度，主要用于檢測植物組織、血清、血漿等樣品中過氧化氫(H2O2)含量。該試劑盒僅用于科研領域不適用于臨床診斷或其他用途。
二、產品組成：
三、自備材料：
1、蒸餾水、丙酮
2、勻漿器或研缽
3、低溫離心機
4、分光光度計、比色杯
1、準備樣品︰
①植物樣品∶取正?；蚰婢诚碌男迈r植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取5g ，加入5ml預冷的丙酮，在冰浴條件下迅速勻漿或研磨，4℃ 12000g離心20min，收集上清液，測量提取液總體積，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，4℃保存，用于過氧化氫的檢測。
③高活性樣品∶如果樣品中含有較高濃度的過氧化氫，可以使用丙酮進行恰當?shù)南♂尅?/span>
2、配制10mM H2O2標準溶液∶由于過氧化氫不是非常穩(wěn)定，使用前需自行測定過氧化氫的實際濃度，該試劑盒提供的H2O2基液的H2O2濃度約為1M，用蒸餾水稀釋100倍，使H2O2濃度約為10mM，蒸餾水調零，分光光度計測定A240，根據公式H2O2濃度(mM)=22.94×A240計算出H2O2基液中H2O2的實際濃度，再用丙酮稀釋H2O2基液配制10mM H2O2丙酮標準溶液(一般情況下新配制的10mM H2O2基液A240為0.4~0.45，3個月以后A240為0.35~0.42)。
按下表依次稀釋(常用濃度0.3-3mM,即1~5號)∶
- 配制硫酸鈦溶液∶0.3g 硫酸鈦加入 6ml蒸餾水中，即為5%硫酸鈦溶液，4C保存。
- H2O2加樣∶按照下表設置空白管、標準管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡;如果樣品中的H2O2濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置平行管。
- H2O2測定∶混勻，室溫放置5min ， 12000g離心15min，棄上清液，留取沉淀，如有必要可加入預冷丙酮反復洗滌沉淀物，向各管的沉淀中加入2ml酸性基液，搖動，使沉淀完全溶解;比色杯光徑1cm，空白管調零，分光光度計測定412nm處各標準管、測定管的吸光度，如果沒有分光光度計，亦可用酶標儀檢測。
五、計算:以系列丙酮-H2O2標準(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8 mM)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，求得回歸方程;以測定管吸光度代入回歸方程求得待測樣品中H2O2的濃度。
組織樣品H2O2(mmol/g)=(C0×VT×N)/m
液體樣品H2O2 (mmol/L)=C0×N
式中:
Co=根據待測樣品的吸光度在標準曲線求得H2O2濃度(mM)
VT=待測樣品的總體積(L)
m=樣品質量(g)
N=樣本稀釋倍數(shù)
六、注意事項:
1、該試劑盒亦可用酶標儀進行檢測，但檢測的樣本數(shù)相應增加。
2、加入堿性基液、硫酸鈦溶液時，應直接加入至溶液中，不要粘到管壁。
3、過氧化物-鈦復合物黃色沉淀溶解于酸性基液時需要一段時間，需完全溶解，否則有可能影響測定結果。
4、H2O2基液和堿性基液應嚴格密閉保存，避免揮發(fā)，否則效率會下降。
5、H2O2基液和酸性基液有一定腐蝕性，請小心操作。
6、硫酸鈦溶解于水后應盡早使用，如暫時不用，可短期放置4℃冰箱保存﹔亦可用分析天平稱取一定量的粉劑，配置5%的濃度即可。
7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
七、 有效期∶12個月有效。
- 附錄∶標準曲線制作: 雅吉生物在室溫條件下按說明書操作，對系列標準進行吸光度的測定，其吸光度及標準曲線如下(僅供參考)，我們采用H2O2標準(0.1、0.3、0.5、0.8、1、3.5、8 、10mM)繪制標準曲線(標準品濃度過高或過低都有可能影響標準曲線的準確性)∶
注意:H2O2濃度低于0.3mM基本無色，0.3~1mM為黃色，3~10mM為橙黃色，效果參考如下。
