質(zhì)粒擴(kuò)增說明書
一、產(chǎn)品信息
二、擴(kuò)增流程
收到產(chǎn)品后，請(qǐng)先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉（請(qǐng)務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆重提后使用）
①收到質(zhì)粒干粉后請(qǐng)先5000rpm離心1min，再加入20μl 無菌水溶解質(zhì)粒；
②取2μl質(zhì)粒加至100μl 感受態(tài)中，冰浴30min后，42℃熱激90s，再冰浴2min；
③加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min；
④6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀，并全涂至對(duì)應(yīng)抗性LB平板上；
⑤將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置培養(yǎng)14-16h。如果是30度培養(yǎng)則培養(yǎng)20h；
（如果第二天菌落過多，請(qǐng)將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。如果第二天無菌落，請(qǐng)加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化）
⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入抗生素，37℃震蕩培養(yǎng)14~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒。
2、甘油菌：四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng)，酵母菌需要先液體復(fù)蘇。
3、穿刺菌：穿刺接種后四區(qū)劃線，挑單菌落培養(yǎng)。
4、平板：直接挑單菌落液體培養(yǎng)。
5、液體質(zhì)粒：單獨(dú)提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
三、轉(zhuǎn)化圖片
