有機磷類和氨基甲酸酯類
農(nóng)藥殘留速測試劑盒
使用說明書
（酶抑制法）
1 適用范圍
適用于檢測新鮮蔬菜中的有機磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量。
2 檢測依據(jù)
試劑盒使用方法依據(jù)國家標準GB/T 5009.199-2003 《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測》。
3 試劑盒組成
4 溶液配制
4.1緩沖溶液：取500 mL純凈水，加入5 mL緩沖試劑濃縮液，混勻備用，室溫保存；
4.2膽堿酯酶：無需配制，使用時直接取100 μL，4℃冷藏保存；
4.3顯色劑：無需配制，使用時直接取100 μL，4℃冷藏保存；
4.4底物：加入10 mL純凈水溶解，使用時直接取100 μL，4℃冷藏保存。
5 樣品提取
選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土等雜物后取樣。葉菜一般取來自不同植株葉片的葉尖部樣品，果菜從不同個體的表皮處取樣。
葉菜取2克1 cm見方葉尖部分于樣品杯中，莖類及水果取3克1 cm見方表皮于樣品杯中；加入10 mL緩沖液，震蕩1-2 min；倒出提取液或過濾液，靜置2 min待測。
蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄汁液等樣品中，含有對酶有影響的植物次生物質，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提；一些含葉綠素較高的蔬菜時，也可采取整株（體）浸提的方法，減少色素干擾。
6 操作步驟
6.1對照測試
在一支干凈試管中分別加入2.5 mL緩沖溶液，100 μL顯色劑，100 μL膽堿酯酶，混勻；37℃恒溫設備中放置10分鐘后加入100 μL底物，搖勻并立即倒入比色皿，用農(nóng)殘檢測儀進行對照測試。
6.2樣品測試
在另一支干凈試管中分別加入2.5 mL樣品提取液，100 μL顯色劑，100 μL膽堿酯酶，混勻；37℃恒溫設備中放置10分鐘后加入100 μL底物，搖勻并立即倒入比色皿，用農(nóng)殘檢測儀進行樣品測試。儀器根據(jù)測定結果顯示出抑制率。
操作提示：在加底物的環(huán)節(jié)中，可預先將底物加入比色皿中，待恒溫靜置10分鐘時間一到，馬上將反應管中的反應液倒入已經(jīng)加有底物的比色皿中，并迅速放入測試通道進行測試，這樣可以減少同時檢測多個樣品時因加底物時間過長而造成的誤差。
7 結果判定
以分光光度計測試時，于412 nm處測定吸光度值在3分鐘內(nèi)的變化，按以下計算公式算出抑制率：
抑制率（%）=[(△A0-△At)/ △A0]×100%
以農(nóng)殘檢測儀檢測時，其抑制率＞50%時檢測結果為陽性，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在。對于陽性結果的樣品需要重復檢驗2次以上，如有必要，可用其他方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
8注意事項
8.1酶活性要求：本試劑盒中酶正?；钚?/span>△A0≥0.3，符合國標方法要求；
8.2使用：任何試劑應遵循使用一瓶配制一瓶原則，用前應搖勻，用完后才是用新試劑，防止變質；
8.3試劑只出不入原則：從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次吸入瓶內(nèi)，以免交叉污染；
8.4對色素干擾嚴重的過濾液，可用活性碳脫色處理，過濾或離心后，取清液作為樣品提取液。
9 貯存條件與有效期
9.1保存：試劑盒應保存于4℃冰箱，保質期12個月，常溫保存3個月；