在ELISA試劑盒中通常有三次加樣步聚，即加標本，加酶聯(lián)絡物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質局部濃縮，散布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強烈振動。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只需待血清天然凝聚、縮短后即可取得。ELISA試劑盒也可在板孔中參與稀釋液，然后在微型轟動器上轟動1分鐘以保證混和。通常說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超越一星期測定的需低溫冰存。
可用作ELISA試劑盒測定的標本十分廣泛，體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其間某種抗體或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗不需用的有些應及時放回冰箱保存。在間接法ELISA試劑盒中可使本底加深。
下面將敘說ELISA試劑盒板式ELISA各個操作過程的留神要害，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與格外儀器協(xié)作應用，嚴峻遵從劃定操作，必能得出的成果。ELISA試劑盒加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留神不可濺起，不可產憤慨泡。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。
ELISA試劑盒實驗中需留心下列的細節(jié)：
1. 嚴格按照規(guī)定的時刻和溫度進行溫育以保證成果。一切試劑都必須在運用前到達室溫20-25℃。運用后當即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確能夠導致不的成果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔枯燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的色彩，現(xiàn)已變藍的底物液不能運用。
5. 防止試劑和標本的穿插污染以免形成錯誤成果。
6. 在儲存和溫育時防止強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反響試劑不能觸摸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會損壞試劑盒中反響試劑的生物活性。
9. 不能運用過期產品。
10. 假如可能傳播疾病，一切的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測設備。