這種多重ELISA試劑盒用于Th1/Th2/Th17細胞因子，旨在半定量和同時測定與T輔助細胞分化相關的細胞因子。該試劑盒同時測定干擾素-γ（IFN-γ）、白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-10（IL-10）、白細胞介素-13（IL-13）、白細胞介素-17A（IL-17A）、白細胞介素-22（IL-22）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α），在細胞培養(yǎng)上清液和其他生物樣本中。結合其他Anogen定量細胞因子ELISA試劑盒，Th1/Th2/Th17細胞因子多重ELISA試劑盒有望用于研究各種疾病模型中細胞因子表達與T輔助細胞分化之間的關系。

該試劑盒僅供實驗室研究使用，不應在任何診斷或治療程序中使用。

艾美捷Anogen多重人細胞因子ELISA試劑盒(Th1/Th2/Th17)#EM10003檢測原理：

這種酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）應用了一種稱為定量夾心免疫測定的技術。試劑盒中包含的8孔條上的微孔已預先涂有針對IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17、IL-22和TNF-α的單克隆抗體。然后將標準品或樣本添加到條上，稍后將添加生物素標記的檢測抗體混合物。如果存在上述細胞因子，它們將通過預先涂在孔上的抗體結合并固定，然后被生物素結合物“夾心”。微孔板孔被徹底清洗以去除樣本中未結合的成分。為了定量測定樣本中存在的細胞因子量，向每個微孔板孔中添加與辣根過氧化物酶（HRP）結合的親和素并孵育。親和素是一種含有四個相同亞基的四聚體，每個亞基都有一個對生物素具有高親和力的結合位點?？妆粡氐浊逑匆匀コ形唇Y合的HRP標記的親和素。向每個孔中添加TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺）底物溶液。酶（HRP）和底物被允許在短暫的孵育期間反應。只有那些含有涂層抗體和特定細胞因子、生物素標記的抗體和酶標記的親和素的孔才會發(fā)展成藍色。顏色發(fā)展的強度與每個孔中存在的特定細胞因子的濃度成正比。通過添加硫酸溶液終止酶-底物反應，顏色將變?yōu)辄S色。強度在450納米±2納米的波長下通過分光光度計測量。

樣本與用類似基質稀釋的標準品一起測試，或使用試劑盒提供的校準稀釋液之一。這允許操作員產生光密度（O.D）與細胞因子濃度（pg/mL）的關系。然后通過將樣本的O.D.與標準品進行比較來確定樣本中細胞因子的濃度。

程序限制：

-在某些情況下，高水平的干擾因素可能導致異常結果。

-試劑盒不應在試劑盒標簽上的有效期之后使用。

-標準稀釋液、操作員移液技術、洗滌技術、孵育時間或溫度以及試劑盒年齡的任何變化都可能導致試劑盒性能的變化。

-生物樣本中存在的可溶性受體或其他結合蛋白不一定干擾樣本中配體的測量。然而，在測試這些因素之前，不能排除干擾的可能性。

結果計算：

從A行到H行，每個孔上的OD讀數(shù)反映了IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-22和TNF-α這八種細胞因子的濃度。在半定量檢測中，可以從高濃度標準和低濃度的OD讀數(shù)生成8個粗略曲線，通過將樣本在每個8個孔中的OD讀數(shù)繪制到其標準曲線上，可以獲得樣本中細胞因子的近似濃度。如標準曲線部分所示，實際標準曲線不必完全直線，因此，從兩點導出的粗略曲線獲得的濃度可能不是很準確。

為了獲得更準確的結果，操作員可以與測試樣本同時測試更多的稀釋點。對于定量測量多個樣本中的單一細胞因子濃度，Anogen也提供了單個細胞因子的定量ELISA檢測試劑盒。

標準曲線：

上述數(shù)據(jù)生成的細胞因子標準曲線僅供參考。

文獻參考：

1. Harrington, LE; Hatton, RD; Mangan, PR; Turner, Henrietta; Murphy, Theresa L; Murphy, Kenneth M; Weaver, Casey T (2005). "Interleukin 17-producing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages". Nature

Immunology 6 (11): 1023–32.

2. Hirota K, Duarte JH, Veldhoen M, Hornsby E, Li Y, Cua DJ, Ahlfors H, Wilhelm C, Tolaini M, Menzel U, Garefalaki A, Potocnik AJ, Stockinger B. Nat Immunol; Duarte; Veldhoen; Hornsby; Li; Cua; Ahlfors; Wilhelm; Tolaini; Menzel; Garefalaki; Potocnik; Stockinger (2011). “Fate mapping of IL-17 producing T cells in inflammatory responses. Nature Immunology 12 (3): 255–63

3. Nakayamada S., Takahashi H., Kanno Y., O'Shea J.J. (2012). “Help T cell diversity and plasticity” Current Opinion in Immunology 24 (3): 297–302.

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