"NCI-H1404細胞:人乳頭狀腺癌細胞系
細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞生長:貼壁
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分
細胞培養(yǎng)方面注意的幾點:無菌意識要強:實驗進行前,超凈臺以紫外燈照射30分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟超凈工作臺風扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置,其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以70%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在中央無菌區(qū)域,一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基:不同的細胞可能培養(yǎng)基不同,甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞,有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基,而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,此時,我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:4℃冰箱全溶后再分裝,在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后,將血清放入,待溫度升高到56℃后計時,一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須,一般不要作此熱處理,因為會造成沉淀物之顯著增多,且會影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。
絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性。如果和標準形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化好導致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細胞的特性,是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細胞之后會對你越來越不好。
細胞傳代時消化的問題:可以這樣說,對于需要消化傳代的細胞,每一次的消化都是對這個細胞存活與否,狀態(tài)好與不好最至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題,自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞,狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入胰酶后,所有細胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的,他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。(以難消化細胞為例);具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍,(這是前奏,即為步,目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了。)3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(你也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比。)這是第三步。4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細胞間隙明顯,細胞獨立開來的時候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實際情況你自己把握)。這是第四步。其實還可以有第五步,對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話,你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,沒辦法,你必須分多批多次消化,這樣才能限度地將胰酶對細胞的損傷降到最低,保證細胞的狀態(tài)能夠。當然了,如果細胞是屬于那種很容易消化的細胞,像RAW264.7,僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較,去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。將細胞消化分成這幾步,除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外,還有一個更重要的作用就是,可以程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài),不成片不連體。
Bowes melanoma cells細胞系相關產(chǎn)品:HCC-1187細胞、Panc327細胞、QGY-7701細胞
COLO 206細胞系相關產(chǎn)品:H-1650細胞、MC-3T3-E1細胞、HEC-1-A細胞
C57 Mouse Tumor 93細胞系相關產(chǎn)品:Ramos(RA1)細胞、HeLa-229細胞、Sf21細胞
HRMC細胞系相關產(chǎn)品:Institute for Medical Research-90細胞、3T3-Swiss細胞、Hs852T細胞
HOS TE 85細胞系相關產(chǎn)品:293AD細胞、LI7細胞、MOVAS-1細胞
H-2122細胞系相關產(chǎn)品:SF126細胞、MDA231-LM2-4175細胞、TF1細胞
RPTEC/TERT 1細胞系相關產(chǎn)品:RFL6細胞、NCIH1568細胞、Psi2 DAP細胞
H441細胞系相關產(chǎn)品:HHL5細胞、H748細胞、MNNG/HOS Clone F-5細胞
C2BBe 1細胞系相關產(chǎn)品:KYSE-510細胞、Hepa-RG細胞、130T細胞
D407 RPE細胞系相關產(chǎn)品:NCI H508細胞、SuDHL 10細胞、GM05384細胞
PK-136細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H1876細胞、NCI-H295細胞、DHL-8細胞
MDA MB 134VI細胞系相關產(chǎn)品:KYSE410細胞、DHL-4細胞、PK-136細胞
SaOS-2細胞系相關產(chǎn)品:A2058細胞、HO8910PM細胞、LNCaP-FGC細胞
SW-620細胞系相關產(chǎn)品:COR-L51細胞、CHO/dhFr-細胞、SW1088細胞
MDA330細胞系相關產(chǎn)品:Pt K2細胞、PG [Human lung carcinoma]細胞、ROS-17/2.8細胞
CCRF SB細胞系相關產(chǎn)品:H-1355細胞、KTCTL-140細胞、A101D細胞
CCRF SB細胞系相關產(chǎn)品:H-1355細胞、KTCTL-140細胞、A101D細胞
NCI-H1437細胞系相關產(chǎn)品:H2141細胞、MV 3細胞、KBM-7/Hap8細胞
J45.01細胞系相關產(chǎn)品:H-87細胞、Mesothelial cells transfected with pRSV-T 5A細胞、KYSE0030細胞
DoHH-2細胞系相關產(chǎn)品:MSCs(mUCMSCs)細胞、Lung cancer-1/squamous細胞、RAW264.7細胞
NCI-H1882細胞系相關產(chǎn)品:HOPC細胞、SEM細胞、SKCO-1細胞
HTR-8/SV neo細胞系相關產(chǎn)品:BDCM細胞、RMa-bm細胞、NCI-H747細胞
NR8383.1細胞系相關產(chǎn)品:NCIH520細胞、COC1/CDDP細胞、A2058細胞
NRK52E細胞系相關產(chǎn)品:HCC-1500細胞、SK-MEL-2細胞、SKNEP1細胞
WERI-Rb1細胞系相關產(chǎn)品:GCT細胞、Human Intestinal Epithelial Cell-6細胞、CAOV3細胞
PLA-801C細胞系相關產(chǎn)品:FHL124細胞、BTT739細胞、PC-3細胞
B16 subline B78細胞系相關產(chǎn)品:SKMEL-2細胞、DMS-273細胞、CALU1細胞
DLD1細胞系相關產(chǎn)品:AgC11x3A細胞、Roswell Park Memorial Institute 1846細胞、Mahlavu細胞
NCI-H226細胞系相關產(chǎn)品:Doubling time: ~50 hours (ATCC).細胞、H820細胞、RA細胞
ID8/MOSEC細胞系相關產(chǎn)品:QGP1細胞、NCIN87細胞、ADR-RES細胞
RMC-1細胞系相關產(chǎn)品:VM-CUB-I細胞、LC-1-sq細胞、HuT102細胞
H1882細胞系相關產(chǎn)品:HONE1細胞、L cell細胞、LY細胞
Neuro 2a細胞系相關產(chǎn)品:A10細胞、HCC-95細胞、OLN 93細胞
U266細胞系相關產(chǎn)品:MV-4-11細胞、H1993細胞、AZ-521細胞
SGC-996細胞系相關產(chǎn)品:Hs 604.T細胞、HCET細胞、LAN1細胞
HIBEC細胞系相關產(chǎn)品:NCI-BL1339細胞、DOK細胞、NG-108-15細胞
SW 1088細胞系相關產(chǎn)品:NTera2/D1細胞、Hs888T細胞、ECV 304細胞
HT-22細胞系相關產(chǎn)品:HCC 70細胞、Lewis lung carcinoma line 1細胞、Walker 256細胞
RH8994細胞系相關產(chǎn)品:SVGp12細胞、Opossum Kidney細胞、NCI-H3255細胞
MPC-83細胞系相關產(chǎn)品:PL9細胞、MC 116細胞、H1355細胞
Hs 281.T細胞系相關產(chǎn)品:COLO-320-DM細胞、NCM460細胞、ARH-77細胞
Human Foreskin Fibroblast細胞系相關產(chǎn)品:STC-1細胞、LoMeT-ccRcc細胞、H-1882細胞
Hs 934.T細胞系相關產(chǎn)品:MV4-11細胞、NCIH2030細胞、G 401細胞
HUT 125細胞系相關產(chǎn)品:LTEP a2細胞、TPC1細胞、SW260細胞
DLD1細胞系相關產(chǎn)品:AgC11x3A細胞、Roswell Park Memorial Institute 1846細胞、Mahlavu細胞
Madison 109細胞系相關產(chǎn)品:NCI-BL2141細胞、SK RC 52細胞、H510細胞
675T細胞系相關產(chǎn)品:L-428細胞、VM-CUB-I細胞、FRTL 5細胞
H1944細胞系相關產(chǎn)品:Giant Cell Tumor細胞、HFF1細胞、8505C細胞
PLA801D細胞系相關產(chǎn)品:P388-D1細胞、LU-65M細胞、LTEP-a-2細胞
PT-K75細胞系相關產(chǎn)品:KBM5細胞、NCIH548細胞、HMVEC細胞
EJ細胞系相關產(chǎn)品:Hepa-RG細胞、SNT8細胞、CORL105細胞
Caov-3細胞系相關產(chǎn)品:BLO 11細胞、LUDLU 1細胞、SUM-52細胞
KNS62細胞系相關產(chǎn)品:LLC-MK-2細胞、AML12細胞、SKNEP-1細胞
C4-2 Bone metastatic細胞系相關產(chǎn)品:H-82細胞、SW-527細胞、NBL-7細胞
TGHAVSMC細胞系相關產(chǎn)品:HCC70細胞、Hs839.T細胞、Raji細胞
Granta-519細胞系相關產(chǎn)品:RMS13細胞、RPMI 8226/S細胞、SUM 102PT細胞
MDA MB 453細胞系相關產(chǎn)品:M-G63細胞、T47D:A細胞、C32-mel細胞
VM-CUB-I細胞系相關產(chǎn)品:SHIN-3細胞、HFL 1細胞、HOS(TE85)細胞
TSCC1細胞系相關產(chǎn)品:SW-756細胞、M4e細胞、HuP-T4細胞
CEM-T4細胞系相關產(chǎn)品:MDA-MB 468細胞、OCI-AML-2細胞、MDCK (NBL-2)細胞
J774細胞系相關產(chǎn)品:LuCL4細胞、SKM1細胞、H-2066細胞
NCIH1819細胞系相關產(chǎn)品:CW2細胞、SUM52PE細胞、SVEC 4-10細胞
TE8細胞系相關產(chǎn)品:RASMC細胞、NKM-1細胞、PLA-801D細胞
THP 1細胞系相關產(chǎn)品:HUT-226細胞、C2C12細胞、KMS-26細胞
NR-8383細胞系相關產(chǎn)品:SU4細胞、NK92細胞、HFL 1細胞
NCIH1838細胞系相關產(chǎn)品:High Five細胞、A-20細胞、RMS 1598細胞
Farage細胞系相關產(chǎn)品:NRK clone 52E細胞、NTera2/D1細胞、H-1522細胞
NCIH810細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H2126細胞、NFHIOSE-29細胞、LS513細胞
SK LU 1細胞系相關產(chǎn)品:EMT6細胞、LA-N-6(OAN)細胞、NCIH1836細胞
HCT/FU細胞系相關產(chǎn)品:Hs 27細胞、Panc-1-P細胞、HUVSMC細胞
BCaP 37細胞系相關產(chǎn)品:LA-N-1細胞、H-28細胞、OK-WT細胞
UWB1289細胞系相關產(chǎn)品:A 2780 CP細胞、MLA 144細胞、L-5178-Y細胞
C57 Mouse Tumor 93細胞系相關產(chǎn)品:Ramos(RA1)細胞、Hs 281.T細胞、NCI H929細胞
Porcine Kidney-13細胞系相關產(chǎn)品:MDA231-LM2細胞、HHL-5細胞、SK-N-FI細胞
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