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上海賓穗生物科技有限公司

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NCI-H295細胞:人腎上腺皮質(zhì)癌細胞系
發(fā)布日期:2020/7/12 16:28:09發(fā)布人:上海賓穗生物科技有限公司

"NCI-H295細胞:人腎上腺皮質(zhì)癌細胞系
細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞生長:貼壁
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分
培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇:細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中,儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融?!緝龃婕毎浚?選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液;2)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液,計數(shù),使細胞密度達5×10/ml左右密度,離心,去上清;3)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO)或甘油,可使冰點降低,使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外;4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液;5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標(biāo)記;6)凍存:在特殊的儀器或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內(nèi)水分透出,太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷?!緩?fù)蘇細胞】1)從罐中取出凍存管;2)迅速放入36℃~37℃水浴,不時搖動,使其急速融化,30~60s內(nèi)完成;3)凍存管用70%酒精擦拭消毒后,打開蓋子,用吸管將細胞懸液注入離心管中,再滴加10ml培養(yǎng)液;4)低速離心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培養(yǎng)液洗一次;5)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,裝入培養(yǎng)瓶37℃培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后,繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數(shù)量要充分,密度應(yīng)達到10/ml,在融后稀釋20倍時,仍能保持5×10/ml數(shù)量。
凍存和復(fù)蘇的原則:慢凍快融》當(dāng)細胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下變化:細胞器脫水,細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細胞逐步脫水,細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。慢凍程序》1.標(biāo)準(zhǔn)程序:采用細胞凍存器》當(dāng)溫度在-25℃以上時,1~2℃/min;當(dāng)溫度達-25℃以下時,5~10℃/min;當(dāng)溫度達-100℃時,可迅速放入液氮中。2.簡易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內(nèi),紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40min內(nèi)降至液氮表面過夜,次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。細胞凍存方法:1.預(yù)先配制凍存液》(1)8%DMSO+細胞生長液(92%血清)2.取對數(shù)生長期細胞,經(jīng)胰酶消化后,加入適量凍存液,用吸管吹打制成細胞懸液(1×10(6)~5×10(6)細胞/ml)。3.加入1ml細胞于凍存管中,密封后標(biāo)記冷凍細胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細胞的復(fù)蘇方法:1.快速解凍》凍存細胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在1分鐘內(nèi)全部融化(不要超過3分鐘)。2.解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng),24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液,以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍后的細胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護劑,然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
細胞培養(yǎng)實驗相關(guān)問題總結(jié):支原體(mycoplasma)污染的細胞,是否能以肉眼觀察出異狀?不能。除極有經(jīng)驗之專家外,大多數(shù)遭受支原體污染的細胞株,無法以其外觀分辨之;支原體污染會對細胞培養(yǎng)有何影響?支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數(shù),代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進行實驗前,必須確認細胞為mycoplasma-free,實驗結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義;偵測出細胞株有支原體污染時,該如何處理?直接滅菌后丟棄,以避免污染其它細胞株;CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之;為何培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中,顏色會偏暗紅色,且pH值會越來越偏堿性?培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時,可以通入無菌過濾之CO2,以調(diào)整pH值;購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
HOC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCC 25細胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞、H-2023細胞
SkChA-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CMT93細胞、Human ErythroLeukemia細胞、H-211細胞
Nb 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3F442A細胞、A-549細胞、G401細胞
SCH細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUP T1細胞、Metastatic Variant 522細胞、DoHH-2細胞
CNE1-LUC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE3A細胞、C643細胞、H-889細胞
H1623細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCILY7細胞、HO-8910PM細胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3細胞
HFL 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MIA Paca2細胞、Panc 04.03細胞、HCC-1937細胞
SKNBE2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PGBE1細胞、C26細胞、DHL-2細胞
Calu-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-378細胞、OP-9細胞、Hs 611.T細胞
PLC-8024細胞系相關(guān)產(chǎn)品:aTC1-6細胞、BT-B細胞、AMC-HN8細胞
NK-92MI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SLMT1細胞、SUPB-15細胞、NCI-SNU-407細胞
OCI/AML-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDST8細胞、293FT細胞、He La細胞
Hep 3B2.1-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDAMB134細胞、LAPC4細胞、BT-325細胞
Immortalized Human Hepatocytes細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-7721細胞、H-774細胞、CaES-17細胞
Mouse Colon 38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTC1細胞、SNU-484細胞、MDA-231細胞
Pa18C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-766T細胞、BSC40細胞、NCI-441細胞
Pa18C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HS-766T細胞、BSC40細胞、NCI-441細胞
P-3J細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE14細胞、NCI-H1944細胞、VMCUB-1細胞
PLC-8024細胞系相關(guān)產(chǎn)品:aTC1-6細胞、BT-B細胞、AMC-HN8細胞
3 LL細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UM-UC14細胞、NCI-H1954細胞、GM03671細胞
UM-UC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FM88細胞、YT細胞、C3H/10T1/2細胞
NK-92.05細胞系相關(guān)產(chǎn)品:32D-Cl3細胞、H1573細胞、NCI-H146細胞
MS 751細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCA5細胞、BALB 3T3 clone A31細胞、NCI-H520細胞
MGSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM 115細胞、Hs675細胞、16HBE14o-細胞
MDAPC2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:M07e細胞、H2106細胞、SF539細胞
NCIH28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SJRH 30細胞、Tu 177細胞、3 LL細胞
HaCaT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HO-1-N-1細胞、Be Wo細胞、MGSMC細胞
COLO 741細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H820細胞、hs 68細胞、LA-795細胞
JHH7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE354.T細胞、GM03190細胞、WERI-Rb-1細胞
NCI-H250細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-295細胞、H1341細胞、NCI-H226細胞
SW1271細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT325細胞、P3X63 AG8-653細胞、3T3L1細胞
FLC7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00346B細胞、OVCAR8細胞、Nb2細胞
P3-x63-Ag8 653細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H23細胞、NCIH2126細胞、MV3細胞
J82細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y1細胞、SW-480細胞、CAKI 1細胞
mIMCD3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-023細胞、CEM C7細胞、CNE-1細胞
Oka-C1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-719細胞、NCI-H322細胞、HHFK細胞
2B4-L細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNF1細胞、Hs 343.T細胞、GM04680細胞
NCI-H1694細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1048細胞、OKAC1細胞、NCI-H441細胞
PANC0403細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-540細胞、RGE細胞、A704細胞
IPLB-SF 21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HITT15細胞、RIN Cl-5F細胞、CLL-CII細胞
D10.G4.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHP-126細胞、QGY-7703細胞、MDA-MB157細胞
MADB-106細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MNNG/HOS Clone F-5細胞、MUTZ-1細胞、Caov-3細胞
C-28/I2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C-32細胞、L-5178-Y-R細胞、BNCL-2細胞
U-CH1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL33細胞、Rin-M-5F細胞、CT26WT細胞
PC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK-2細胞、NCI-H1770細胞、NUGC3細胞
COLO 829細胞系相關(guān)產(chǎn)品:F81細胞、Swiss3T3細胞、SK-UT-1細胞
FF-WT-BJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hTERT-HPNE細胞、R 2 C細胞、H-4細胞
NK92MI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE 450細胞、Biologics Standards-Cercopithecus-1細胞、Lu99A細胞
NB9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM451細胞、A-9細胞、MPC11細胞
H-1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVG p12細胞、H1734細胞、WM-239A細胞
HEC-1B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPB/ALL細胞、SW-982細胞、H226細胞
SACC83細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BMSCs(mBMSCs)細胞、MLMA細胞、SF17細胞
SKNO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC-151細胞、IEC-18細胞、C32 [Human melanoma]細胞
IAR 20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NG-108-15細胞、N9細胞、293 F細胞
LS-1034細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2107細胞、OsACL細胞、A 549細胞
P31 FUJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB453細胞、PAMC82細胞、NT2/D1細胞
EAC-E2G8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OVCAR3細胞、TM-3細胞、A9 (Hamprecht)細胞
Sf21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-251_MG細胞、NHRF細胞、HT-3細胞
BGC823細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KM12SM細胞、Hep G2/C3A細胞、MLMA細胞
LWnt3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2195細胞、NCI-H2330細胞、SGC-7901細胞
Alpha Mouse Liver 12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KTC-1細胞、COV-362細胞、EAhy 926細胞
HT1080細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK-13細胞、PANC.1細胞、OS-732細胞
Evsa T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF-539細胞、U138細胞、IOSE 80細胞
Colon-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEM/0細胞、786-0WT細胞、LTEP-s細胞
H3396細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H1693細胞、KYSE 410細胞、WSU-DLCL(2)細胞
WILL2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-128細胞、CORL279細胞、OVCAR-4細胞
Tokyo Medical and Dental university 8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEK細胞、HB 611細胞、FLC-7細胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EFM19細胞、DHL-2細胞、U937細胞
RGB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RL細胞、LTEP a2細胞、SK-MES細胞
KE-39細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs706T細胞、SUP-B1細胞、T47D:A細胞
SB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SU8686細胞、SEG-1細胞、Huh-7.5細胞
H-2591細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTori-3細胞、Ej138細胞、HCC1588細胞
Nb 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:3T3F442A細胞、2PK-3細胞、MDA-415細胞
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