"NCI-H295細胞：人腎上腺皮質(zhì)癌細胞系
細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分
培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-１９６℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融?！緝龃婕毎浚?選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數(shù)，使細胞密度達５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外；４)分裝于無菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記；６)凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時間內(nèi)，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩?fù)蘇細胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時搖動，使其急速融化，３０～６０s內(nèi)完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達到１０／ml，在融后稀釋２０倍時，仍能保持５×１０／ml數(shù)量。
凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍快融》當(dāng)細胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反，結(jié)晶就大，大結(jié)晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。慢凍程序》1.標(biāo)準(zhǔn)程序：采用細胞凍存器》當(dāng)溫度在-25℃以上時，1~2℃/min；當(dāng)溫度達-25℃以下時，5~10℃/min；當(dāng)溫度達-100℃時，可迅速放入液氮中。2.簡易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內(nèi)，紗布袋系以線繩，通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口，按每分鐘溫度下降1~2℃的速度，在40min內(nèi)降至液氮表面過夜，次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序：冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時（或隔夜）→液氮槽長期儲存。細胞凍存方法：1.預(yù)先配制凍存液》（1）8%DMSO+細胞生長液（92%血清）2.取對數(shù)生長期細胞，經(jīng)胰酶消化后，加入適量凍存液，用吸管吹打制成細胞懸液（1×10(6)~5×10(6)細胞/ml）。3.加入1ml細胞于凍存管中，密封后標(biāo)記冷凍細胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細胞的復(fù)蘇方法：1.快速解凍》凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）。2.解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍后的細胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
細胞培養(yǎng)實驗相關(guān)問題總結(jié)：支原體(mycoplasma)污染的細胞，是否能以肉眼觀察出異狀？不能。除極有經(jīng)驗之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之；支原體污染會對細胞培養(yǎng)有何影響？支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數(shù)，代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義；偵測出細胞株有支原體污染時，該如何處理？直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細胞株；CO２培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之；為何培養(yǎng)基保存于４°C冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？培養(yǎng)基保存于４°C冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO２會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時，可以通入無菌過濾之CO２，以調(diào)整pH值；購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形？研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可；購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–８０°C太久；收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
HOC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SCC 25細胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞、H-2023細胞
SkChA-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CMT93細胞、Human ErythroLeukemia細胞、H-211細胞
Nb 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：3T3F442A細胞、A-549細胞、G401細胞
SCH細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SUP T1細胞、Metastatic Variant 522細胞、DoHH-2細胞
CNE1-LUC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE3A細胞、C643細胞、H-889細胞
H1623細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCILY7細胞、HO-8910PM細胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3細胞
HFL 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MIA Paca2細胞、Panc 04.03細胞、HCC-1937細胞
SKNBE2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PGBE1細胞、C26細胞、DHL-2細胞
Calu-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-378細胞、OP-9細胞、Hs 611.T細胞
PLC-8024細胞系相關(guān)產(chǎn)品：aTC1-6細胞、BT-B細胞、AMC-HN8細胞
NK-92MI細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SLMT1細胞、SUPB-15細胞、NCI-SNU-407細胞
OCI/AML-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDST8細胞、293FT細胞、He La細胞
Hep 3B2.1-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDAMB134細胞、LAPC4細胞、BT-325細胞
Immortalized Human Hepatocytes細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-7721細胞、H-774細胞、CaES-17細胞
Mouse Colon 38細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTC1細胞、SNU-484細胞、MDA-231細胞
Pa18C細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-766T細胞、BSC40細胞、NCI-441細胞
Pa18C細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-766T細胞、BSC40細胞、NCI-441細胞
P-3J細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE14細胞、NCI-H1944細胞、VMCUB-1細胞
PLC-8024細胞系相關(guān)產(chǎn)品：aTC1-6細胞、BT-B細胞、AMC-HN8細胞
3 LL細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UM-UC14細胞、NCI-H1954細胞、GM03671細胞
UM-UC-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：FM88細胞、YT細胞、C3H/10T1/2細胞
NK-92.05細胞系相關(guān)產(chǎn)品：32D-Cl3細胞、H1573細胞、NCI-H146細胞
MS 751細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCA5細胞、BALB 3T3 clone A31細胞、NCI-H520細胞
MGSMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WM 115細胞、Hs675細胞、16HBE14o-細胞
MDAPC2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：M07e細胞、H2106細胞、SF539細胞
NCIH28細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SJRH 30細胞、Tu 177細胞、3 LL細胞
HaCaT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HO-1-N-1細胞、Be Wo細胞、MGSMC細胞
COLO 741細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H820細胞、hs 68細胞、LA-795細胞
JHH7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TE354.T細胞、GM03190細胞、WERI-Rb-1細胞
NCI-H250細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-295細胞、H1341細胞、NCI-H226細胞
SW1271細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BT325細胞、P3X63 AG8-653細胞、3T3L1細胞
FLC7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM00346B細胞、OVCAR8細胞、Nb2細胞
P3-x63-Ag8 653細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H23細胞、NCIH2126細胞、MV3細胞
J82細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Y1細胞、SW-480細胞、CAKI 1細胞
mIMCD3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BC-023細胞、CEM C7細胞、CNE-1細胞
Oka-C1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-719細胞、NCI-H322細胞、HHFK細胞
2B4-L細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKNF1細胞、Hs 343.T細胞、GM04680細胞
NCI-H1694細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1048細胞、OKAC1細胞、NCI-H441細胞
PANC0403細胞系相關(guān)產(chǎn)品：L-540細胞、RGE細胞、A704細胞
IPLB-SF 21細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HITT15細胞、RIN Cl-5F細胞、CLL-CII細胞
D10.G4.1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CHP-126細胞、QGY-7703細胞、MDA-MB157細胞
MADB-106細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MNNG/HOS Clone F-5細胞、MUTZ-1細胞、Caov-3細胞
C-28/I2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C-32細胞、L-5178-Y-R細胞、BNCL-2細胞
U-CH1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CAL33細胞、Rin-M-5F細胞、CT26WT細胞
PC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDCK-2細胞、NCI-H1770細胞、NUGC3細胞
COLO 829細胞系相關(guān)產(chǎn)品：F81細胞、Swiss3T3細胞、SK-UT-1細胞
FF-WT-BJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品：hTERT-HPNE細胞、R 2 C細胞、H-4細胞
NK92MI細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE 450細胞、Biologics Standards-Cercopithecus-1細胞、Lu99A細胞
NB9細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WM451細胞、A-9細胞、MPC11細胞
H-1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SVG p12細胞、H1734細胞、WM-239A細胞
HEC-1B細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HPB/ALL細胞、SW-982細胞、H226細胞
SACC83細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BMSCs（mBMSCs）細胞、MLMA細胞、SF17細胞
SKNO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEC-151細胞、IEC-18細胞、C32 [Human melanoma]細胞
IAR 20細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NG-108-15細胞、N9細胞、293 F細胞
LS-1034細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2107細胞、OsACL細胞、A 549細胞
P31 FUJ細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB453細胞、PAMC82細胞、NT2/D1細胞
EAC-E2G8細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVCAR3細胞、TM-3細胞、A9 (Hamprecht)細胞
Sf21細胞系相關(guān)產(chǎn)品：U-251_MG細胞、NHRF細胞、HT-3細胞
BGC823細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KM12SM細胞、Hep G2/C3A細胞、MLMA細胞
LWnt3A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2195細胞、NCI-H2330細胞、SGC-7901細胞
Alpha Mouse Liver 12細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTC-1細胞、COV-362細胞、EAhy 926細胞
HT1080細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PK-13細胞、PANC.1細胞、OS-732細胞
Evsa T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SF-539細胞、U138細胞、IOSE 80細胞
Colon-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CEM/0細胞、786-0WT細胞、LTEP-s細胞
H3396細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1693細胞、KYSE 410細胞、WSU-DLCL(2)細胞
WILL2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-128細胞、CORL279細胞、OVCAR-4細胞
Tokyo Medical and Dental university 8細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CEK細胞、HB 611細胞、FLC-7細胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EFM19細胞、DHL-2細胞、U937細胞
RGB細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RL細胞、LTEP a2細胞、SK-MES細胞
KE-39細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs706T細胞、SUP-B1細胞、T47D:A細胞
SB細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SU8686細胞、SEG-1細胞、Huh-7.5細胞
H-2591細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HTori-3細胞、Ej138細胞、HCC1588細胞
Nb 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：3T3F442A細胞、2PK-3細胞、MDA-415細胞
QG-56細胞系相關(guān)產(chǎn)品：no.11細胞、CHL-CL-11細胞、Mv1.Lu細胞
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