豬偽狂犬病毒gE蛋白阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒
使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱】
通用名：豬偽狂犬病毒gE蛋白阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒
英文名：Blocking ELISA Kit For Detection Pseudorabies Virus gE Antibody
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 偽狂犬病又名奧耶斯基氏病（Aujeszky's disease），是由偽狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的家畜和多種野生動(dòng)物的一種以發(fā)熱、奇癢、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)疾病為特征的急性傳染病。該病免疫預(yù)防用的疫苗為gE基因缺失疫苗（也有聯(lián)用gI、TK基因缺失），因此檢測(cè)gE蛋白的抗體可作為野毒感染的指標(biāo)。
本試劑盒用于檢測(cè)豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體，可用于區(qū)別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬。
【試劑盒組成】
【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血，以4000r/min 離心10分鐘，收集血清；或待血液凝固后自然析出血清，再收集血清。血清應(yīng)清亮，無(wú)溶血。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按1:1稀釋（如100μl血清加入100μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
溫馨提示：先使用血清稀釋板稀釋完所有的待檢血清、再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到抗原包被板上，使反應(yīng)時(shí)間一致。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應(yīng)1小時(shí)。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加300μl工作洗滌液，無(wú)需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)20分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔加入底物顯色液100μl，置室溫( 20～25℃)避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加入終止液50μl，混勻，10分鐘內(nèi)于630nm測(cè)定各孔吸光值。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)≥0.6，陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)≤0.5。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.S為樣品孔OD630nm值，N為陰性對(duì)照OD630nm平均值。
如果S/N≤0.6，判定為陽(yáng)性；
如果0.6＜S/N≤0.7，判定為可疑；
如果S/N＞0.7，判為陰性。
2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性表明該豬可能有野毒感染，或是用非gE基因缺失疫苗免疫的。
【試驗(yàn)方法的局限性】
本檢測(cè)結(jié)果僅供篩查，不作為確診依據(jù)。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.若試劑盒陰陽(yáng)性對(duì)照、酶標(biāo)記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬于正?，F(xiàn)象。
4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。