本周為大家?guī)?lái)的文獻(xiàn)為發(fā)表于Hum Vaccin Immunother. (IF: 4.8)的” Recombinant BCG vaccine expressing multistage antigens of Mycobacterium tuberculosis provides long-term immunity against tuberculosis in BALB/c mice”。本文使用了LabEx提供的Luminex檢測(cè)服務(wù)。
幾千年來(lái),結(jié)核病一直威脅著世界人類。盡管唯一獲批使用的結(jié)核病疫苗卡介苗已在全球廣泛使用了幾十年,但結(jié)核病的流行仍帶來(lái)了挑戰(zhàn)。設(shè)計(jì)新型結(jié)核病疫苗的方法有多種,包括亞單位疫苗、減毒活疫苗和重組卡介苗。然而,它們都無(wú)法取代卡介苗。該研究中,研究者構(gòu)建了表達(dá)由 ESAT-6、CFP-10 和潛伏抗原 DnaK 表位富集區(qū)組成的融合蛋白的 rBCG-ECD003。我們通過(guò)測(cè)定 BALB/c 小鼠的多種細(xì)胞因子分泌能力、多功能 CD4+T 細(xì)胞亞群和體液免疫反應(yīng)來(lái)評(píng)估其免疫原性。此外,我們還驗(yàn)證了 rBCG-ECD003 對(duì)小鼠體內(nèi) Mtb 生長(zhǎng)的體外療效及其安全性??傊?,研究結(jié)果表明 rBCG-ECD003 有可能提高卡介苗的長(zhǎng)期有效性。
LabEx提供的Luminex檢測(cè)服務(wù):
在多重細(xì)胞因子檢測(cè)中,將脾臟淋巴細(xì)胞懸浮液以 1 × 105 個(gè)細(xì)胞/孔的比例接種到 96 孔 U 型底平板中,分別用 10 μg/ 孔的 PPD、ECD003 和作為陰性對(duì)照的培養(yǎng)基刺激。在 37°C 孵育 24 小時(shí)后,用 400 g 離心機(jī)離心 5 分鐘,收集上清液。按照制造商的說(shuō)明(LabEx),用 Luminex 多重細(xì)胞因子檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞因子的產(chǎn)生,包括 IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-12、IL-4、IL-10、IL-6、IL-17 和 GM-CSF。
為了研究小鼠接種 rBCG-ECD003 疫苗后的綜合免疫力,我們比較了第 4 周和第 12 周 9 種細(xì)胞因子的產(chǎn)生情況。不出所料,除 TNF-α 外,PBS 組的主要測(cè)試細(xì)胞因子產(chǎn)量在各組中保持在最低水平。
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用 rBCG-ECD003 免疫 BALB/c 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生情況。
重要發(fā)現(xiàn):
本研究評(píng)估了表達(dá)特定抗原ESAT-6、CFP-10和nDnaK的重組卡介苗(rBCG-ECD003)在免疫BALB/c小鼠后不同時(shí)間點(diǎn)的免疫效果。
結(jié)果顯示,與親代卡介苗相比,rBCG-ECD003 能誘導(dǎo)多種 Th1 細(xì)胞因子分泌,包括 IFN-γ、TNF-α、IL-2 和 IL-12。
在 PPD 或 ECD003 的作用下,rBCG-ECD003 免疫可顯著增加 IL-2+ 和 IFN-γ+IL-2+ CD4+T 細(xì)胞的比例。
rBCG-ECD003 能誘導(dǎo)更強(qiáng)的長(zhǎng)期體液免疫反應(yīng),而不影響親代卡介苗的安全性。
通過(guò)體外保護(hù)效力試驗(yàn),rBCG-ECD003 顯示出更強(qiáng)的長(zhǎng)期抑制 Mtb 生長(zhǎng)的能力。
rBCG-ECD003 的這些特點(diǎn)表明它具有長(zhǎng)期保護(hù)作用,并有望控制 Mtb 感染。
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基因水平:PCR Array、RT-PCR、PCR、單細(xì)胞測(cè)序
蛋白水平:MSD、Luminex、CBA、Elispot、Antibody Array、ELISA、Sengenics
細(xì)胞水平:細(xì)胞染色、細(xì)胞分選、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞功能
組織水平:空間多組學(xué)、多重?zé)晒饷庖呓M化、免疫組化、免疫熒光
數(shù)據(jù)分析:流式數(shù)據(jù)分析、組化數(shù)據(jù)分析、多因子數(shù)據(jù)分析
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