DUAL membrane系統(tǒng)是DUAL systems BioTech公司開發(fā)的專門篩選跨膜蛋白間相互作用的檢測(cè)技術(shù)，它利用分離的泛素系統(tǒng) (split-ubiquitin)直接檢測(cè)天然狀態(tài)下膜蛋白間的相互作用，是目前市面上唯一檢測(cè)膜蛋白間相互作用的酵母雙雜系統(tǒng)。此系統(tǒng)采用NMY51酵母菌株，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫(kù)試驗(yàn)；此菌株Transformation marker為：trp1，leu2-3，報(bào)告基因?yàn)椋篐IS3，ADE2和 lacZ，第一步通過營(yíng)養(yǎng)缺陷型報(bào)告基因 (HIS3，ADE2)進(jìn)行選擇性生長(zhǎng)篩選，進(jìn)一步通過 LacZ報(bào)告基因進(jìn)行β-半乳糖分析顯色的定量或半定量篩選，三個(gè)獨(dú)立的報(bào)告基因，受不同啟動(dòng)子的調(diào)控，降低假陽(yáng)性幾率。泛素 (ubiquitin)分子量很小，由 76 aa殘基組成；泛素作為降解信號(hào)分子，可以連接另外一種蛋白質(zhì)的 N端，然后被泛素專一性蛋白酶 (UBPs)識(shí)別，從而導(dǎo)致與泛素相連的蛋白被酶解。泛素可以人為分成兩部分：N端 (Nub)，C端 (Cub)。首先，人為地將泛素 Nub的 3位異亮氨酸突變?yōu)楦拾彼?(NubI 突變?yōu)?NubG)。這樣與 Cub的親合力大大降低，避免了 Cub和 Nub自我結(jié)合或接近的可能性。其次，將Cub部分與人工合成的 LexA-VP16轉(zhuǎn)錄激活因子融合成一個(gè)融合蛋白Cub-LexA-VP16。正常條件下 NubG不與Cub 結(jié)合，UBPs也不能識(shí)別分離的泛素，轉(zhuǎn)錄激活因子也不會(huì)被切下來。最后，將要檢測(cè)的蛋白質(zhì)分別與NubG和Cub融合，形成 bait融合蛋 (bait-cub-LexA-VP16)和 prey融合蛋白 (prey-NubG)。如果 bait和 prey發(fā)生相互作用，就會(huì)促使 NubG和 Cub的相互接近，被 UBPs識(shí)別，導(dǎo)致 LexA-VP16的解離，進(jìn)入核內(nèi)，從而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。此系統(tǒng)可使用四種Bait質(zhì)粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，篩選標(biāo)志均為L(zhǎng)EU；三種Prey質(zhì)粒：pPR3-C ，pPR3-SUC，pPR3-STE，篩選標(biāo)志均為TRP。