RNA克隆是將載體用限制性內切酶雙酶切得到線性化的載體；需要同時合成兩種序列不完全相同的寡核苷酸片段，這兩種寡核苷酸片段在退火后形成雙鏈DNA片段；載體和雙鏈DNA片段通過T4 DNA連接酶連接，得到環(huán)型的DNA分子。最后將連接得到的DNA分子轉化細菌，通過篩選得到正確的基因克隆。體外轉錄合成ShRNAs法，是按照生命合成RNA過程的原理，用轉錄方法來合成ShRNAs，其ShRNA最接近生命自然狀態(tài)中的dsRNA，RNA干擾效果也最好。較化學合成而言，體外轉錄制備ShRNA的優(yōu)勢在于成本低、質量高、毒性小和穩(wěn)定性均較好。