介紹
羰基氰化氯苯腙（Carbonyl Cyanide 3-Chlorophenylhydrazone，簡(jiǎn)稱CCCP）是一種氧化磷酸化抑制劑，同時(shí)也是線粒體質(zhì)子載體解偶聯(lián)劑。分子式為C9H5ClN4，外觀為黃色粉末。
羰基氰化氯苯腙
應(yīng)用
羰基氰化氯苯腙抗農(nóng)業(yè)病原細(xì)菌活性測(cè)定
本實(shí)驗(yàn)中所用的菌株為實(shí)驗(yàn)室?80℃含30％甘油凍存的菌株。將凍存菌株取出，分別在農(nóng)業(yè)細(xì)菌的NB固體培養(yǎng)基(牛肉膏：3g，蛋白胨：5g，酵母粉：1g，蔗糖：10g，瓊脂：15g，蒸餾水：1L，p H7.0；121℃滅菌20min)上面進(jìn)行劃線，在28℃下恒溫培養(yǎng)直到長(zhǎng)出單菌落。分別挑取固體培養(yǎng)基上單菌落至農(nóng)業(yè)細(xì)菌NB液體培養(yǎng)基(牛肉膏：3g，蛋白胨：5g，酵母粉：1g，蔗糖：10g，蒸餾水：1L；121℃滅菌20min)在28℃、180rpm恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌株用相應(yīng)的液體培養(yǎng)基稀釋至約106 CFU/m L備用。將化合物分別用DMSO溶解，加入液體培養(yǎng)基中，混合均勻，配制成濃度為200μg/m L的含藥液體培養(yǎng)基。取50μL含藥培養(yǎng)基和相同體積的含約106 CFU/m L細(xì)菌培養(yǎng)物加入到96孔板的孔中，最終給藥濃度為100μg/m L。含等量DMSO的相同濃度100μL菌液做對(duì)照。將96孔板在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?48h直至對(duì)照組菌液長(zhǎng)出，在酶標(biāo)儀上測(cè)定孔中菌液的OD值(OD600)。并且另外測(cè)定100μL液體培養(yǎng)基和濃度為100μg/m L藥劑的OD值，對(duì)培養(yǎng)基和藥劑本身造成的OD值進(jìn)行矯正。結(jié)果發(fā)現(xiàn)羰基氰化氯苯腙對(duì)測(cè)定菌株均表現(xiàn)出優(yōu)異的抑制作用，在100μg/m L對(duì)水稻白葉枯病病原菌、柑橘潰瘍病病原菌以及馬鈴薯黑脛病病原菌活性強(qiáng)于商業(yè)化用藥噻菌銅。其中對(duì)水稻白葉枯病病原菌作用最強(qiáng)，MIC值最小可達(dá)1.56μg/m L。
羰基氰化氯苯腙抗農(nóng)業(yè)病原真菌活性測(cè)定
本實(shí)驗(yàn)中所用的農(nóng)業(yè)病原菌為實(shí)驗(yàn)室4℃保存的菌種，采用的培養(yǎng)基為馬鈴薯瓊脂葡萄糖培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱PDA)。PDA培養(yǎng)基配方：馬鈴薯(去皮)200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水1000m L，自然PH。PDA培養(yǎng)基配置方法：將馬鈴薯洗凈去皮，稱200g切成小塊，蒸餾水煮20min左右(土豆塊軟而不爛)，用八層紗布過(guò)濾，用蒸餾水將濾液補(bǔ)足至1000m L，加入15g瓊脂，20g葡萄糖，攪拌使其充分溶解后，分裝于三角瓶中，121℃滅菌20分鐘，冷卻后備用。室內(nèi)活性測(cè)定采用菌絲生長(zhǎng)速率法。菌種活化：將農(nóng)業(yè)病原菌在PDA平板上25℃培養(yǎng)3～6天。制備藥板：將PDA培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至45?50℃，分別加入不同濃度混配物制成帶藥平板。接種培養(yǎng)：在超凈臺(tái)中，用打孔器在培養(yǎng)3～6天的菌絲邊緣(生長(zhǎng)狀況盡量一致)打取菌餅(直徑5mm)，再用接種針挑至藥板中央，然后在培養(yǎng)箱(25℃)中倒置培養(yǎng)。結(jié)果測(cè)定：空白對(duì)照組菌絲長(zhǎng)滿后，采用十字交叉法測(cè)得給藥組菌絲的生長(zhǎng)直徑，計(jì)算抑制率。抑制率(％)＝(對(duì)照菌絲直徑?處理菌絲直徑)/(對(duì)照菌絲直徑?菌餅直徑)×100，每個(gè)濃度設(shè)置3次平行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)羰基氰化氯苯腙特別是針對(duì)農(nóng)業(yè)病原真菌番茄灰霉具有顯著的抑制作用[1]。
參考文獻(xiàn)
[1]劉映前,張保琪,趙文斌,等.羰基氰化氯苯腙在防治農(nóng)業(yè)病原菌中的用途[P].甘肅省:CN202111413827.1,2022-04-12.