簡(jiǎn)述
氨來(lái)諾又名氨來(lái)呫諾，化學(xué)名稱(chēng)為2-氨基-7-異丙基-5-氧代-5H-[1]苯并吡喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸，其分子式為C16H14N2O4，分子量為298.29，其原料藥性狀為米黃色粉末。
1996年，氨來(lái)諾經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)成為第一個(gè)治療口腔潰瘍的處方藥。世界上迄今已有20多個(gè)國(guó)家和地區(qū)將它用作治療口腔潰瘍的一線藥物。氨來(lái)諾過(guò)去主要用來(lái)治療哮喘和復(fù)發(fā)性口腔潰瘍等，非經(jīng)典的IKK相關(guān)的酶IKKε和TBK1的近來(lái)研究證實(shí)其能調(diào)節(jié)肥胖小鼠的能量代謝、胰島素敏感性和慢性炎癥。氨來(lái)諾通過(guò)阻斷IKKε和TBK1信號(hào)途徑，減輕慢性炎癥、促進(jìn)胰島素敏感性，減少可逆性體重，減輕肝臟脂肪變性，是一個(gè)極有前景的治療肥胖病和2型糖尿病的藥物[1]。
有關(guān)研究
氨來(lái)諾作為一個(gè)能改善經(jīng)典炎癥(以“紅、腫、熱、痛”為特征的炎癥，亦稱(chēng)為“熱炎癥”)的老藥，其精確的分子機(jī)制及作用靶點(diǎn)尚不明確?，F(xiàn)有研究證明，氨來(lái)諾對(duì)于二型糖尿病、非酒精性脂肪肝的肥胖患者也有確切的治療效果，此作用是通過(guò)抑制冷炎癥靶點(diǎn)IKKε/TBK1 同源激酶來(lái)實(shí)現(xiàn)的。但在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介導(dǎo)的熱炎癥中，IKKε的敲除不僅未造成促炎因子表達(dá)減少反致其增加。同時(shí)也正是在這一炎癥模型中，IKKε/TBK1抑制劑氨來(lái)呫諾卻展現(xiàn)出明確的抗炎效果，這表明IKKε/TBK1一定不是氨來(lái)諾對(duì)抗熱炎癥的作用靶點(diǎn)。為了考察氨來(lái)諾在熱炎癥中的作用及其分子機(jī)制，以靜脈注射LPS引起小鼠內(nèi)毒素血癥作為熱炎癥體內(nèi)模型、LPS處理RAW264.7巨噬細(xì)胞作為體外模型，分別以Griess法和ELISA法測(cè)定氨來(lái)諾對(duì)熱炎癥相關(guān)因子的效果。以全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀掃描氨來(lái)諾的激發(fā)-發(fā)射3D掃描圖譜以獲得其最佳激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)，并使用激光共聚焦熒光顯微鏡確定其在巨噬細(xì)胞中的分布特征。在巨噬細(xì)胞中，通過(guò)RT-qPCR、報(bào)告基因、Western Blotting等方法研究氨來(lái)諾對(duì)LPS活化的NF-κB和MAPK/AP-1通路中關(guān)鍵信號(hào)事件的作用。最后，利用分子對(duì)接、熒光偏振、無(wú)細(xì)胞體系酶活實(shí)驗(yàn)、基因靜默等技術(shù)確定氨來(lái)諾在熱炎癥中的作用靶點(diǎn)。結(jié)果，LPS致內(nèi)毒素血癥小鼠血清中的IL-6及TNF-α濃度顯著上升，氨來(lái)諾能顯著降低這兩種炎癥因子的水平，并壓制該模型小鼠腹腔灌流液中TNF-α增高。在LPS活化巨噬細(xì)胞體外模型中，氨來(lái)諾不僅能抑制TNF-α的分泌，還能減少NO的釋放以及其合成酶iNOS的活性和表達(dá)，并且促進(jìn)抗炎因子IL-10分泌。
機(jī)制研究表明，氨來(lái)諾能減少I(mǎi)κBα磷酸化并阻止其降解，抑制了隨后的NF-κB
p65亞單位易位入核及轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性。另一方面，可阻止ERK1/2磷酸化及下游的AP-1活化。同時(shí)，氨來(lái)諾可持續(xù)增高LPS刺激的巨噬細(xì)胞內(nèi)cAMP的水平、活化其效應(yīng)蛋白PKA，并影響cAMP/PKA信號(hào)調(diào)控的胞內(nèi)氯離子水平和尼日利亞菌素介導(dǎo)的IL-1β釋放。而cAMP對(duì)抗劑可抵消氨來(lái)諾對(duì)炎癥介質(zhì)NO、TNF-α的抑制作用。研究還發(fā)現(xiàn)氨來(lái)諾自身具有熒光，其最佳激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為352nm/398nm。利用其熒光特性，檢測(cè)到氨來(lái)諾孵育巨噬細(xì)胞十分鐘即可完成入胞、主要分布區(qū)域?yàn)榧?xì)胞質(zhì)。分子對(duì)接預(yù)測(cè)，在細(xì)胞質(zhì)中它可能通過(guò)π-π堆積和離子鍵結(jié)合到PDE4B水解cAMP的活性口袋中。熒光偏振實(shí)驗(yàn)顯示，PDE4B可使氨來(lái)諾的熒光偏振值單向、持續(xù)變大，意味著氨來(lái)諾的確可直接與人PDE4B酶結(jié)合。而加入另一種非選擇性PDE抑制劑IBMX可部分對(duì)抗該結(jié)合。在無(wú)細(xì)胞體系酶活抑制實(shí)驗(yàn)中，氨來(lái)諾不僅可直接抑制PDE4B活性(IC50=11
μM)，也對(duì)PDE1A、PDE3A、PDE3B 有效，IC50 分別為 18μM、3
μM、18μM，因此氨來(lái)諾對(duì)PDE的抑制作用是非選擇性的。但在RAW264.7細(xì)胞中，PDE3選擇性抑制劑并不影響LPS誘導(dǎo)的炎癥因子分泌，而敲低PDE4B后氨來(lái)諾的抗炎作用全部消失。以上實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)氨來(lái)諾是一種非選擇性PDE抑制劑。在LPS活化的巨噬細(xì)胞中，氨來(lái)諾能靶向抑制PDE4B減少其底物cAMP水解，進(jìn)而激活cAMP的效應(yīng)激酶PKA。活化的PKA不僅能夠通過(guò)阻止IκBα的降解及隨后的p65轉(zhuǎn)位入核來(lái)減少轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化，還通過(guò)減少ERK1/2的磷酸化來(lái)抑制AP-1的轉(zhuǎn)錄活性。而對(duì)NF-κB及ERK/AP-1兩條信號(hào)通路的抑制最終會(huì)表現(xiàn)為促炎因子iNOS和TNF-α表達(dá)水平的降低，從而緩解熱炎癥[2]。
參考文獻(xiàn)
[1]余美霞,沈振新,倪健,等.氨來(lái)呫諾的抗炎機(jī)制及抗肥胖研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志,2015,24(12):1374-1381.
[2]韓宜芯. 氨來(lái)呫諾通過(guò)靶向抑制脂多糖活化巨噬細(xì)胞中的磷酸二酯酶4B發(fā)揮抗炎作用[D].北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2022.DOI:10.27648/d.cnki.gzxhu.2021.000451.