研究背景

維羅非尼(PLX4032)是由羅氏公司開發(fā)的一種激酶抑制劑，用于治療轉移性或不可切除黑色素瘤。黑色素瘤通過BRAF V600突變使BRAF蛋白恒定激活，導致細胞無限增殖和生長，以及侵襲其他組織。該物質的作用機制便是通過抑制BRAF蛋白（RAS-RAF-MEK-ERK信號通路的組成部分）的活性來實現靶向治療，從而抑制黑色素瘤的生長和擴散。臨床試驗表明，維羅非尼在治療BRAF V600突變陽性的黑色素瘤患者中具有顯著的療效。研究顯示，與傳統(tǒng)的化療方案相比，維羅非尼能夠顯著延長患者的無進展生存期和總生存期。研究還發(fā)現，該藥物可改善患者的生活質量，并減輕癥狀，如疼痛和疲勞。

盡管維羅非尼在治療黑色素瘤中取得了很大的成功，但它也存在一些副作用。最常見的副作用是皮膚相關反應，如皮疹、干燥、瘙癢和日光過敏。這可能會對患者的生活造成一定的困擾，但通常是可控制的。此外，維羅非尼還可能導致發(fā)熱、惡心、嘔吐、關節(jié)痛和頭痛等不良反應。在一些罕見的情況下，維羅非尼可能會引起更嚴重的副作用，如心臟問題、肝臟損害和視覺障礙。因此，在使用維羅非尼之前，醫(yī)生必須對患者進行全面評估，并定期進行監(jiān)測。

聯合用藥研究

（一）維羅非尼聯合西妥昔單抗對BRAF突變型和野生型結直腸癌細胞株的作用

應用MTT法檢測，將不同濃度西妥昔單抗，維羅非尼單藥以及兩藥聯合分別作用于BRAF突變型結直腸癌細胞株RKO，HT-29和BRAF野生型結直腸癌細胞株DIFI，CACO-2后，觀察各細胞株增殖變化。通過集落形成實驗,，經過長時間培養(yǎng)細胞驗證不同處理因素對細胞增殖的抑制作用。Western blot實驗檢測EGFR下游通路靶蛋白的活性在兩藥聯合后是否出現明顯下調。

結果顯示，單藥治療，西妥昔單抗能一定程度抑制BRAF野生型結直腸癌細胞株增殖，抑制率達26%~40%，而BRAF突變組兩種細胞株對西妥昔單抗均耐藥。維羅非尼對不同基因狀態(tài)細胞的增殖均有一定的抑制作用，IC50均小于7μmol/mL，其中BRAF突變細胞更為敏感。對比單藥西妥昔單抗，聯合維羅非尼后更加明顯地抑制了細胞增殖，4種細胞存活率均明顯降低(P＜0.05)。長時間集落形成實驗證實兩藥聯合形成集落的面積和數量均明顯減少。Western Blot實驗顯示對比單藥，兩藥聯合明顯下調了p-EGFR，BRAF，p-ERK的表達。也就是說，BRAF抑制劑維羅非尼無論在BRAF突變型還是野生型結直腸癌細胞株中，均能增強西妥昔單抗作用的敏感性[1]。

（二）維羅非尼（VEM）聯合西達苯胺(CDM)對繼發(fā)性急性髓系白血病(secondary acute myeloid leukemia,sAML)細胞衰老的影響。

以sAML細胞系為研究對象(n=3)，實驗分為對照組，VEM單藥組，CDM單藥組，VEM+CDM組。CCK-8實驗檢測sAML細胞增殖抑制率，免疫熒光技術檢測sAML細胞衰老發(fā)生，流式細胞術檢測sAML細胞周期分布及凋亡發(fā)生，Swiss Target Predict，TargetNe，SEA及PharmMapper等4個網絡藥理學數據庫預測VEM聯合CDM的可能靶點和信號通路，RT-qPCR實驗分析及驗證VEM聯合CDM的可能機制。

結果，VEM以時間劑量依賴性抑制sAML細胞增殖，VEM的半數抑制濃度(IC_(50))在SKM-1和MOLM-13細胞中分別為(24.15±1.18)μmol/L(P<0.0001)和(11.30±0.38)μmol/L(P<0.0001)，VEM(SKM-1:1/3 IC_(50)-VEM，MOLM-13:1/2 IC_(50)-VEM)聯合CDM協(xié)同抑制sAML細胞增殖(P<0.01)；VEM聯合CDM促進sAML細胞衰老相關標志物TRF2和Lamin B1表達；VEM聯合CDM可使sAML細胞周期停滯于G_0/G_1期(P<0.05)，并促進sAML細胞凋亡發(fā)生(P<0.05)。同時，網絡藥理學及RT-qPCR實驗分析并驗證VEM協(xié)同CDM通過抑制PI3K-AKT及MAPK信號通路促進sAML腫瘤細胞衰老發(fā)生(P<0.05)。也就是說，VEM聯合CDM通過下調PI3K-AKT及MAPK信號通路促進sAML細胞衰老發(fā)生，抑制sAML細胞增殖及促進sAML細胞凋亡，提示VEM聯合CDM方案可能是sAML患者新的治療方案[2]。

制備方法

文獻公開了一種維羅非尼與哌嗪共晶及其制備方法，這種共晶包含摩爾比為1:1的維羅非尼和哌嗪，以Cu Kα射線測得的X射線粉末衍射圖譜在衍射角度2theta值為7.6±0.2°，15.2±0.2°，17.3±0.2°，21.5±0.2°，22.2±0.2°處具有特征峰。本發(fā)明提供的維羅非尼與哌嗪共晶在引濕性，穩(wěn)定性，溶解度和口服生物利用度方面具有顯著優(yōu)勢。此外，該共晶制備方法工藝簡單，結晶過程易于控制，重現性好，適用于工業(yè)化生產[3]。

參考文獻

[1]馬瑞,徐玲,曲秀娟,et al.維羅非尼聯合愛必妥對結直腸癌細胞株的作用研究[J].微生物學雜志, 2017, 37(2):6.DOI:10.3969/j.issn.1005-7021.2017.02.014.

[2]周巧,梁思敏,蔡鐸,等.維羅非尼聯合西達苯胺促進繼發(fā)性急性髓系白血病細胞衰老[J].陸軍軍醫(yī)大學學報, 2023, 45(16):1671-1681.

[3]陳嘉媚,王智情,戴霞林.一種維羅非尼與哌嗪共晶及其制備方法.CN202110861746.1.