研究背景

維羅非尼(PLX4032)是由羅氏公司開發(fā)的一種激酶抑制劑，用于治療轉(zhuǎn)移性或不可切除黑色素瘤。黑色素瘤通過BRAF V600突變使BRAF蛋白恒定激活，導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖和生長，以及侵襲其他組織。該物質(zhì)的作用機(jī)制便是通過抑制BRAF蛋白（RAS-RAF-MEK-ERK信號通路的組成部分）的活性來實(shí)現(xiàn)靶向治療，從而抑制黑色素瘤的生長和擴(kuò)散。臨床試驗(yàn)表明，維羅非尼在治療BRAF V600突變陽性的黑色素瘤患者中具有顯著的療效。研究顯示，與傳統(tǒng)的化療方案相比，維羅非尼能夠顯著延長患者的無進(jìn)展生存期和總生存期。研究還發(fā)現(xiàn)，該藥物可改善患者的生活質(zhì)量，并減輕癥狀，如疼痛和疲勞。

盡管維羅非尼在治療黑色素瘤中取得了很大的成功，但它也存在一些副作用。最常見的副作用是皮膚相關(guān)反應(yīng)，如皮疹、干燥、瘙癢和日光過敏。這可能會對患者的生活造成一定的困擾，但通常是可控制的。此外，維羅非尼還可能導(dǎo)致發(fā)熱、惡心、嘔吐、關(guān)節(jié)痛和頭痛等不良反應(yīng)。在一些罕見的情況下，維羅非尼可能會引起更嚴(yán)重的副作用，如心臟問題、肝臟損害和視覺障礙。因此，在使用維羅非尼之前，醫(yī)生必須對患者進(jìn)行全面評估，并定期進(jìn)行監(jiān)測。

聯(lián)合用藥研究

（一）維羅非尼聯(lián)合西妥昔單抗對BRAF突變型和野生型結(jié)直腸癌細(xì)胞株的作用

應(yīng)用MTT法檢測，將不同濃度西妥昔單抗，維羅非尼單藥以及兩藥聯(lián)合分別作用于BRAF突變型結(jié)直腸癌細(xì)胞株RKO，HT-29和BRAF野生型結(jié)直腸癌細(xì)胞株DIFI，CACO-2后，觀察各細(xì)胞株增殖變化。通過集落形成實(shí)驗(yàn),，經(jīng)過長時間培養(yǎng)細(xì)胞驗(yàn)證不同處理因素對細(xì)胞增殖的抑制作用。Western blot實(shí)驗(yàn)檢測EGFR下游通路靶蛋白的活性在兩藥聯(lián)合后是否出現(xiàn)明顯下調(diào)。

結(jié)果顯示，單藥治療，西妥昔單抗能一定程度抑制BRAF野生型結(jié)直腸癌細(xì)胞株增殖，抑制率達(dá)26%~40%，而BRAF突變組兩種細(xì)胞株對西妥昔單抗均耐藥。維羅非尼對不同基因狀態(tài)細(xì)胞的增殖均有一定的抑制作用，IC50均小于7μmol/mL，其中BRAF突變細(xì)胞更為敏感。對比單藥西妥昔單抗，聯(lián)合維羅非尼后更加明顯地抑制了細(xì)胞增殖，4種細(xì)胞存活率均明顯降低(P＜0.05)。長時間集落形成實(shí)驗(yàn)證實(shí)兩藥聯(lián)合形成集落的面積和數(shù)量均明顯減少。Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示對比單藥，兩藥聯(lián)合明顯下調(diào)了p-EGFR，BRAF，p-ERK的表達(dá)。也就是說，BRAF抑制劑維羅非尼無論在BRAF突變型還是野生型結(jié)直腸癌細(xì)胞株中，均能增強(qiáng)西妥昔單抗作用的敏感性[1]。

（二）維羅非尼（VEM）聯(lián)合西達(dá)苯胺(CDM)對繼發(fā)性急性髓系白血病(secondary acute myeloid leukemia,sAML)細(xì)胞衰老的影響。

以sAML細(xì)胞系為研究對象(n=3)，實(shí)驗(yàn)分為對照組，VEM單藥組，CDM單藥組，VEM+CDM組。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測sAML細(xì)胞增殖抑制率，免疫熒光技術(shù)檢測sAML細(xì)胞衰老發(fā)生，流式細(xì)胞術(shù)檢測sAML細(xì)胞周期分布及凋亡發(fā)生，Swiss Target Predict，TargetNe，SEA及PharmMapper等4個網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測VEM聯(lián)合CDM的可能靶點(diǎn)和信號通路，RT-qPCR實(shí)驗(yàn)分析及驗(yàn)證VEM聯(lián)合CDM的可能機(jī)制。

結(jié)果，VEM以時間劑量依賴性抑制sAML細(xì)胞增殖，VEM的半數(shù)抑制濃度(IC_(50))在SKM-1和MOLM-13細(xì)胞中分別為(24.15±1.18)μmol/L(P<0.0001)和(11.30±0.38)μmol/L(P<0.0001)，VEM(SKM-1:1/3 IC_(50)-VEM，MOLM-13:1/2 IC_(50)-VEM)聯(lián)合CDM協(xié)同抑制sAML細(xì)胞增殖(P<0.01)；VEM聯(lián)合CDM促進(jìn)sAML細(xì)胞衰老相關(guān)標(biāo)志物TRF2和Lamin B1表達(dá)；VEM聯(lián)合CDM可使sAML細(xì)胞周期停滯于G_0/G_1期(P<0.05)，并促進(jìn)sAML細(xì)胞凋亡發(fā)生(P<0.05)。同時，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及RT-qPCR實(shí)驗(yàn)分析并驗(yàn)證VEM協(xié)同CDM通過抑制PI3K-AKT及MAPK信號通路促進(jìn)sAML腫瘤細(xì)胞衰老發(fā)生(P<0.05)。也就是說，VEM聯(lián)合CDM通過下調(diào)PI3K-AKT及MAPK信號通路促進(jìn)sAML細(xì)胞衰老發(fā)生，抑制sAML細(xì)胞增殖及促進(jìn)sAML細(xì)胞凋亡，提示VEM聯(lián)合CDM方案可能是sAML患者新的治療方案[2]。

制備方法

文獻(xiàn)公開了一種維羅非尼與哌嗪共晶及其制備方法，這種共晶包含摩爾比為1:1的維羅非尼和哌嗪，以Cu Kα射線測得的X射線粉末衍射圖譜在衍射角度2theta值為7.6±0.2°，15.2±0.2°，17.3±0.2°，21.5±0.2°，22.2±0.2°處具有特征峰。本發(fā)明提供的維羅非尼與哌嗪共晶在引濕性，穩(wěn)定性，溶解度和口服生物利用度方面具有顯著優(yōu)勢。此外，該共晶制備方法工藝簡單，結(jié)晶過程易于控制，重現(xiàn)性好，適用于工業(yè)化生產(chǎn)[3]。

參考文獻(xiàn)

[1]馬瑞,徐玲,曲秀娟,et al.維羅非尼聯(lián)合愛必妥對結(jié)直腸癌細(xì)胞株的作用研究[J].微生物學(xué)雜志, 2017, 37(2):6.DOI:10.3969/j.issn.1005-7021.2017.02.014.

[2]周巧,梁思敏,蔡鐸,等.維羅非尼聯(lián)合西達(dá)苯胺促進(jìn)繼發(fā)性急性髓系白血病細(xì)胞衰老[J].陸軍軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報, 2023, 45(16):1671-1681.

[3]陳嘉媚,王智情,戴霞林.一種維羅非尼與哌嗪共晶及其制備方法.CN202110861746.1.