背景^[1][2][3]

AIF抗體中的細胞凋亡誘導(dǎo)因子AIF是一種黃素蛋白。細胞凋亡誘導(dǎo)因子通過引起DNA片段化和染色質(zhì)濃縮參與啟動不依賴于胱天蛋白酶的凋亡途徑（細胞凋亡的正內(nèi)在調(diào)節(jié)劑）。它還可作為NADH氧化酶。另一種AIF功能是調(diào)節(jié)線粒體膜對細胞凋亡的滲透性。通常它位于線粒體外膜后面，因此與細胞核隔離。然而，當線粒體受損時，它會移動到細胞質(zhì)和細胞核。

AIF的失活導(dǎo)致胚胎干細胞在生長因子停止后對死亡的抗性，表明其參與凋亡。細胞凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）是一種蛋白質(zhì)，可觸發(fā)細胞中的染色質(zhì)濃縮和DNA片段化，從而誘導(dǎo)程序性細胞死亡。發(fā)現(xiàn)線粒體AIF蛋白是半胱天冬酶細胞凋亡效應(yīng)器，可以讓細胞核經(jīng)歷細胞凋亡的變化。

當線粒體釋放AIF時，觸發(fā)細胞凋亡的過程開始，AIF通過線粒體膜離開，進入細胞質(zhì)，最后終止于細胞核，在細胞核中，它向細胞發(fā)出信號，凝聚其染色體并分裂其DNA分子，以便為細胞做準備死亡。最近，研究人員發(fā)現(xiàn)AIF的活性取決于細胞類型，凋亡損傷及其DNA結(jié)合能力。AIF還在線粒體呼吸鏈和代謝氧化還原反應(yīng)中起重要作用。

AIF抗體(兔多抗)是通過分子生物學(xué)方法構(gòu)建了重組AIF的表達載體,并誘導(dǎo)實現(xiàn)AIF的大量表達。該重組蛋白以可溶性形式存在,經(jīng)親和柱純化后對家兔進行免疫,得到AIF抗體(兔多抗)。AIF刺激機體，產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng)，由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組免疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體。

一般而言，抗體按靶位點不同主要分為單克隆抗體和多克隆抗體 ，由多個B淋巴細胞克隆產(chǎn)生的，受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結(jié)合的抗體就是多克隆抗體。多抗一般制備流程：完全抗原的準備→兔子的免疫→ 效價檢測和終放→抗體親和純化→抗體的濃縮和保存。

臨床應(yīng)用^[5]

在研究腫瘤的抗凋亡機制中AIF抗體可用免疫組化檢測樣本中AIF的表達水平。凋亡誘導(dǎo)因子(apoptosisinducingfactor, AIF)在胃癌中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法:用免疫印跡法檢測 AIF在細胞中的表達量;用免疫組化法檢測。

組織標本制成蠟塊后,4μm連續(xù)切片,60℃烤片過夜。以二甲苯脫蠟,酒精水化后,予PBS沖洗3次,每次5min。用枸櫞酸鹽高壓修復(fù)組織抗原,然后用3%過氧化氫溶液室溫孵育15min,予PBS沖洗3次,每次5min。用正常兔血清室溫封閉15min,滴加AIF一抗(1:200),濕盒內(nèi)37℃孵育2h后;滴加生物素標記的兔抗山羊IgG二抗,濕盒內(nèi)37℃孵育15min;再滴加辣根酶標記鏈霉卵白素,濕盒內(nèi)37℃孵育15min。

DAB顯色,蘇木素復(fù)染。用PBS代替一抗作空白對照。細胞內(nèi)見棕褐色顆粒者為 AIF表達陽性細胞。 每張切片在高倍鏡下隨機選取 10個視野, 按陽性細胞占同類細胞總數(shù)的百分比來計算。 ≤5%為陰性(-), 6%-29%為低表達(+), 30% -60%為表達陽性(++), 61%-100%為表達強陽性(+++)。

參考文獻

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5.   凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)在胃癌細胞和組織中的表達及意義[J]. 王昌正,李英男,吳本儼,朱鳴,王衛(wèi)華.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué) . 2008 (07)