背景[1]
生物素-標(biāo)記羊抗兔免疫球蛋白(H+L)是將羊抗兔免疫球蛋白(H+L)進(jìn)行生物素化標(biāo)記制成的熒光標(biāo)記二抗，許多生物素分子可以與第二抗體偶聯(lián)，而鏈霉親和素的另一優(yōu)點(diǎn)是對生物素具有高親和力。
通過該擴(kuò)增步驟并使抗生蛋白鏈菌素與標(biāo)記物（例如HRP或熒光探針）結(jié)合，更有可能檢測到低水平表達(dá)的蛋白質(zhì)。對于大多數(shù)測定，首先添加生物素標(biāo)記的第二抗體，然后依次加入與標(biāo)記物（例如HRP）偶聯(lián)的鏈霉親和素。Biotin（生物素）廣泛分布于動、植物組織中，常從含量較高的卵黃和肝組織中提取，分子量244。31kD。隨著各種生物素衍生物的問世，生物素-親合素系統(tǒng)（Biotin-Avidin System，BAS）很快被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。
相關(guān)研究[2-3]
近年大量研究證實(shí)，生物素—親合素系統(tǒng)幾乎可與目前研究成功的各種標(biāo)記物結(jié)合。在生物素-親和素系統(tǒng)中，借助所形成的親和素-生物素-酶復(fù)合物，追蹤生物素標(biāo)記的抗原或抗體，通過酶催化底物顯色，可檢出相應(yīng)的抗體或抗原。由于抗原或抗體分子可偶聯(lián)多個(gè)生物素，且1個(gè)親和素分子可結(jié)合4個(gè)生物素分子，組成新的生物放大系統(tǒng)，進(jìn)一步提高檢測的靈敏度。由于BAS親和力高，所以具有高靈敏度、高特異性和穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，在現(xiàn)代生物免疫學(xué)領(lǐng)域中已得到廣泛應(yīng)用，并顯示出明顯的優(yōu)越性。已報(bào)道有用于放射免疫、免疫熒光和免疫電鏡等技術(shù)中，但應(yīng)用更多的還是在酶免疫技術(shù)中。
應(yīng)用[4][5]
用于電化學(xué)免疫傳感器在腫瘤標(biāo)志物檢測中的應(yīng)用研究
以肝癌血清標(biāo)志物—甲胎蛋白為檢測對象,構(gòu)建了種具有高靈敏性的電化學(xué)免疫傳感器,并對其臨床結(jié)果進(jìn)行了初步評價(jià),主要內(nèi)容如下：成功構(gòu)建了一種基于單抗多抗夾心體系的高靈敏、制備簡單的便攜式多通量電化學(xué)免疫傳感陣列并用于AFP定量檢測。采用物理吸附的方法將捕獲探針抗體固定在印刷電極芯片上,用更簡單的方法得到了比共價(jià)耦聯(lián)更好的抗體組裝效率及抗體組裝量。隨后在靶蛋白和信號探針及多克隆抗體分別反應(yīng)后,酶標(biāo)二抗就可以連接,利用便攜式多通道電化學(xué)儀檢測辣根過氧化物酶催化底物的氧化還原電流就可以實(shí)現(xiàn)檢測。在此基礎(chǔ)上,又引入了Poly-HRP放大技術(shù),將標(biāo)記有羊抗兔IgG的超分子多聚HRP酶復(fù)合物作為信號的載體,可有效增強(qiáng)免疫反應(yīng)電流響應(yīng)的信號,提高了傳感器的檢測靈敏度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對AFP檢測限達(dá)到56pg/ml,同時(shí)有兩個(gè)線性范圍,低濃度區(qū)間為64p-1000p,高濃度區(qū)間為1n-250n。該傳感器具有靈敏度高、線性范圍寬等特點(diǎn),實(shí)現(xiàn)了微量AFP的定量檢測。表明該傳感器在HCC的診斷及AFP檢測方面具有進(jìn)一步的應(yīng)用前景。
參考文獻(xiàn)
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[5]李勝昔.電化學(xué)免疫傳感器在腫瘤標(biāo)志物檢測中的應(yīng)用研究[D].復(fù)旦大學(xué),2012.