DNA PULLDOWN試劑盒性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝

背景

現(xiàn)有研究DNA-蛋白相互作用的技術(shù)方案有多種，如酵母單雜交(Y1H)方法、ChIP-seq方法、凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)和DNA pulldown方法。DNA pulldown方法是一種非常重要的蛋白質(zhì)-DNA相互作用的研究方法。該方法可以在同一個(gè)樣品中分離DNA-蛋白復(fù)合體。通常，是通過(guò)高親和性的標(biāo)簽(如生物素)標(biāo)記DNA，標(biāo)簽的目的是固定DNA，通過(guò)瓊脂糖珠子或磁珠可以分離出生物素化的DNA，從而分離出細(xì)胞裂解液中的DNA-蛋白復(fù)合體。分離出的蛋白進(jìn)行洗脫后可以通過(guò)Western Blot進(jìn)行檢測(cè)，或通過(guò)質(zhì)譜進(jìn)行篩選

操作方法

S1、磁珠預(yù)處理：使用BSA(牛血清白蛋白)和寡核苷酸隨機(jī)引物封閉鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠；S2、制備探針?磁珠復(fù)合物；S3、提取并預(yù)處理細(xì)胞核蛋白：向提取核蛋白樣品中加入脫氧核糖核酸酶孵育，再加入磁珠孵育，去除磁珠，收集上清；S4、pulldown；S5、蛋白樣品的收集。

用途

DNA pulldown是一種用于研究DNA與蛋白質(zhì)互作的技術(shù)。通常用來(lái)分析目標(biāo)基因調(diào)控區(qū)域相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子及其他調(diào)控蛋白。針對(duì)目標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)脫硫生物素標(biāo)記的特異性DNA探針，并與細(xì)胞核提取物孵育。通過(guò)偶聯(lián)磁珠，經(jīng)洗脫，得到目的DNA探針-蛋白質(zhì)復(fù)合物。最后采用Western Blot或質(zhì)譜鑒定蛋白質(zhì)類(lèi)型。

DNA PULLDOWN試劑盒 上下游產(chǎn)品信息

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下游產(chǎn)品

DNA PULLDOWN試劑盒 生產(chǎn)廠家

 

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