溴化乙啶性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝
溴化乙啶(簡稱EB)是目前在紫外線下觀察DNA而常用的一種熒光染料，屬于插入染料，原因是它有多環(huán)結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)使它能夠插入核苷酸堿基之間。由于核酸和堿基的熒光量子產(chǎn)率很低，因此利用天然熒光檢測核酸比蛋白質(zhì)困難更大，所以熒光探針技術(shù)在核酸研究中顯得尤為重要。比較常用的是溴化乙啶(et-hidium bromide或稱菲啶溴紅)，它與核酸 (DNA、RNA、雙鏈多聚核苷酸)有特異結(jié)合的能力。它對脫氧核糖核酸的最低檢測量可達(dá)10ng/ml，而且它與核酸的雙鏈區(qū)結(jié)合是專一的，利用它與各種構(gòu)象核酸結(jié)合比例的不同所產(chǎn)生的熒光強度的變化，可以把各種構(gòu)型核酸加以區(qū)分。例如它能鑒別天然核酸和變性核酸，區(qū)分線性DNA、環(huán)狀DNA和超級線團DNA等。此外各種吖啶，包括吖啶橙、吖啶黃以及前黃素等都是核酸常用的探劑。
熒光分析法可分為直接測定法和間接測定法二種。直接測定法是利用物質(zhì)自身發(fā)射的熒光，即所謂“自熒光”或“內(nèi)源熒光”來進(jìn)行測定。但在自然界中只有少部分物質(zhì)在光激發(fā)后可以發(fā)射熒光，而有相當(dāng)一部分物質(zhì)發(fā)熒光很弱或不發(fā)射熒光，如蛋白和核酸就是發(fā)熒光很弱的物質(zhì)。為了充分利用熒光分析法靈敏度高這一特點就需使其轉(zhuǎn)化成熒光物質(zhì)再進(jìn)行測定。此時可用某些試劑(如熒光染料) 使其與熒光較弱或不顯熒光的物質(zhì)共價或非共價結(jié)合，以形成發(fā)熒光的結(jié)合物再進(jìn)行測定，這就是所謂的“熒光探針”技術(shù)或“熒光標(biāo)記”技術(shù)。使試劑(熒光劑) 吸附在大分子上或共價結(jié)合到大分子上。所用的染料溴化乙啶被叫做“熒光探劑”。探劑熒光特性的變化，實際上是由于大分子構(gòu)象的變化所引起的探劑環(huán)境變化的信號，所以利用這種信號還可以得到大分子構(gòu)象變化的信息。
Ethidium Bromide (Homidium bromide, EtBr, EB) 是一種嵌入劑，與DNA堿基對類似。EtBr在分子生物學(xué)實驗技術(shù)（如瓊脂糖凝膠電泳）中經(jīng)常被用于熒光標(biāo)記（核酸染色）。
Guidelines (Following is our recommended protocol. This protocol only provides a guideline, and should be modified according to your specific needs).
The preparation of agarose gel:
1. Agarose gels are commonly used in concentrations of 0.5% to 2.5% depending on the size of bands needed to be separated.
2. Mix the agarose powder with 1X TAE/TBE.
3. Microwave for 1-3 min until the agarose is completely dissolved (
Caution
: not overboil).
4. Make the solution cool down before solidification.
5. Add ethidium bromide (EtBr) to a final concentration of approximately 0.2-0.5 μg/mL (Stocks are generally 10 mg/ml, and require 5 μL stock/100 mL gel).
6. Ethidium bromide binds to the DNA and you could visualize the DNA under ultraviolet (UV) light.
CAUTION: EtBr is a known mutagen. Please pay attention to strengthening protection.
用途
EB不能穿過活細(xì)胞膜,可通過死細(xì)胞破損膜對細(xì)胞核DNA染色,含一個可嵌入堆積堿基之間的一平面基團,該基團固定位置及與堿基密切接近,致染料與DNA結(jié)合現(xiàn)熒光,因EB-DNA復(fù)合物熒光產(chǎn)率遠(yuǎn)大于未結(jié)合染料熒光,當(dāng)電泳凝膠中含游離EB,可測少量DNA,是高靈敏熒光試劑,也是重要熒光染料,常測DNARNA.與DNA結(jié)合抑制DNA復(fù)制轉(zhuǎn)錄
用途
溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標(biāo)準(zhǔn)302nm 紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號，可用Polaroid 底片或帶CCD 成像頭的凝膠成像處理系統(tǒng)拍攝。 對于在電泳后進(jìn)行凝膠染色，應(yīng)先用水將儲存液樣品稀釋到 0.5μg/ml，再將凝膠孵育 15-30 分鐘。通常無需脫色，但是如果必須降低背景色，則可在水中脫色 15 分鐘。然后可在紫外燈箱（254nm 波長）中檢測 DNA 條帶。也可將溴化乙啶加到凝膠和電泳緩沖液（終濃度 0.5μg/ml）中，并在電泳后立即顯影。
用途
Ethidium bromide (EtBr) is the most commonly used nucleic acid stain for PAGE or agarose gel electrophoresis. The fluorescence of EtBr increases 21-fold upon binding to double-stranded RNA and 25-fold
on binding double-stranded DNA so that destaining the background is not necessary with a low stain concentration.
Ethidium bromide has been used in a number of fluorimetric assays for nuc
leic acids. It has been shown to bind to single-stranded DNA (although not as strongly) and triple-stranded DNA. Because of its ability to bind to DNA, EtBr is an inhibitor of DNA polymerase. Antiprot
ozoal (Trypanosoma).
溴化乙啶
上下游產(chǎn)品信息
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下游產(chǎn)品