61512-21-8
中文名稱(chēng)
胸腺素F5
CAS
61512-21-8
分子式
C127H214O56N33
61512-21-8 結(jié)構(gòu)式
物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀本品系小牛、豬胸腺提取得到的一類(lèi)重要激素。國(guó)外主要用胸腺素組分5, 含有多種多肽，相對(duì)分子質(zhì)量為1000-15000。我國(guó)用的豬胸腺素組分5是等電點(diǎn)為3.5-9.5的不同蛋白質(zhì)組成的混合物，相對(duì)分子質(zhì)量在15000以下。
胸腺素組分5具有免疫活性，具體含有胸腺素α1、胸腺素α5、胸腺素α7、胸腺素β3和胸腺素β4等活性成分，主要作用是促進(jìn)T細(xì)胞分化成熟，誘導(dǎo)前T細(xì)胞(淋巴干細(xì)胞)轉(zhuǎn)化為T(mén)細(xì)胞，并進(jìn)而分化成為具有各種特殊功能的T細(xì)胞亞群，增加和調(diào)整機(jī)體的免疫功能。胸腺素對(duì)熱穩(wěn)定，短時(shí)間內(nèi)加熱至80℃，生物活性不降低。
胸腺素組分5具有免疫活性，具體含有胸腺素α1、胸腺素α5、胸腺素α7、胸腺素β3和胸腺素β4等活性成分，主要作用是促進(jìn)T細(xì)胞分化成熟，誘導(dǎo)前T細(xì)胞(淋巴干細(xì)胞)轉(zhuǎn)化為T(mén)細(xì)胞，并進(jìn)而分化成為具有各種特殊功能的T細(xì)胞亞群，增加和調(diào)整機(jī)體的免疫功能。胸腺素對(duì)熱穩(wěn)定，短時(shí)間內(nèi)加熱至80℃，生物活性不降低。
CAS 數(shù)據(jù)庫(kù)61512-21-8
應(yīng)用領(lǐng)域
用途1
免疫增強(qiáng)劑。治療胸腺發(fā)育不全綜合征、運(yùn)動(dòng)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥等免疫缺陷性疾病。國(guó)內(nèi)用于治療復(fù)發(fā)性口瘡、麻風(fēng)重癥感染等伴有免疫功能低下的患者。不良反應(yīng)：少數(shù)人服用后出現(xiàn)蕁麻疹、皮疹等局部過(guò)敏反應(yīng)，偶見(jiàn)頭昏發(fā)熱等全身過(guò)敏反應(yīng)。注射前應(yīng)做皮試。
制備方法
方法1
方法一、從豬胸腺提取提取、去雜蛋白 將豬胸腺(新鮮或冰凍)絞碎，提取兩次。每次加入2倍量酸性生理鹽水，調(diào)pH約3，10℃以下提取4h, 紗布過(guò)濾。合并兩次濾液，調(diào)pH7左右，水浴80℃保持10min, 冷至10℃以下過(guò)濾或離心， 得提取液。加入冷丙酮約5倍量，靜置4h, 收集沉淀， 用丙酮、乙醚脫水， 得淡黃色丙酮粉。豬胸腺[酸性生理鹽水]→[pH3, 4h×2, 10℃]濾液→[pH7; 80℃]提取液[冷丙酮]→[4h]丙酮粉
丙酮沉淀、去雜蛋白、鹽析 將丙酮粉加入pH7、0.01mol/L CPB去雜蛋白。第一次加入CPB 6倍量體積， 攪拌0.5h, 離心，殘?jiān)偌尤?倍體積的CPB操作一次。 合并兩次清液， 加硫酸銨達(dá)25%飽和度， 調(diào)pH7, 靜置數(shù)小時(shí)，離心去沉淀。上清液調(diào)pH4.6, 加硫酸銨達(dá)50%飽和，攪拌0.5h, 冰箱中靜置數(shù)小時(shí)，離心收集沉淀。
丙酮粉[CPB]→[pH7]清液[(NH4)2SO425%飽和度]→[pH7]上清液[(NH4)SO4 50%飽和度]→[pH4.6]鹽析物
透析去鹽、層析分離 將鹽析物中加入5倍量蒸餾水，調(diào)pH為7。先將冷蒸餾水透析至無(wú)硫酸根離子， 再對(duì)pH7、0.01mol/L CPB透析10h， 透析液離心得上清液。用EDTA-離子交換纖維素柱在pH6-7交換，用pH4、0.02mol/L CPB洗脫， 加冷丙酮沉淀，3號(hào)垂熔漏斗過(guò)濾，得丙酮粉。
去熱原、無(wú)菌灌封 將丙酮粉溶于無(wú)熱原蒸餾水， 用1mol/L鹽酸調(diào)pH6, 加等量乙醚劇烈攪拌1h, 1500r/min離心15min，吸出中層清液，清液以等量乙醚同法洗兩次，合并清液加入5倍量丙酮，析出沉淀，得丙酮干粉。測(cè)定熱原，配制含胸腺素2.5 mg/ml, pH6-7.5, 無(wú)菌灌裝得淡黃色胸腺素注射液。
丙酮粉[蒸餾水，乙醚]→[pH6]無(wú)熱原粉[無(wú)菌灌裝]→[pH6-7.5]胸腺素注射液
方法二、從小牛胸腺中提取
提取、過(guò)濾 將小牛胸腺絞碎后，加0.5%正辛醇-0.9%氯化鈉溶液約3倍量(V/V)進(jìn)行勻漿，然后1500r/min 離心30min, 上清液用紗布過(guò)濾得濾液。
小牛胸腺[0.5%正辛醇-0.9%NaCl]→[離心]上清液[紗布過(guò)濾]→濾液
去雜蛋白 將濾液加熱至80℃ 15min, 冷卻后1500r/min離心30min, 除雜蛋白，得上清液。然后加(NH4)2SO4達(dá)25%飽和度時(shí)，紙漿抽濾，得濾液。
上清液[80℃, 15min]→[離心]上清液[(NH4)2SO4]→[紙漿抽濾]濾液
鹽析、層析分離 濾液用20%的醋酸調(diào)pH值4.0, 加(NH4)2SO4達(dá)50%飽和度， 1500×g離心30min， 得沉淀。用-15℃丙酮洗滌至白色粉末，真空抽干丙酮。粉末溶于0.1mol/L、pH8.4Tris-鹽酸溶液中，4000×g 離心30min, 得上清液。
濾液[醋酸，(NH4)2SO4]→[pH4.0 離心]沉淀[0.1 mol/L Tris-鹽酸]→[pH8.4]上清液
脫鹽 上清液過(guò)Sephadex G-150柱脫鹽，以pH8.4磷酸鹽緩沖液(0.02 mol/L)洗脫，再過(guò)Sephadex G-25柱脫鹽，用蒸餾水洗脫，收集活性峰，冷凍干燥即得胸腺素。
上清液[Sephadex G-150柱]→洗脫液[Sephadex G-25柱]→胸腺素。