"F9 Cells(贈送Str鑒定報告)|小鼠畸胎瘤細胞

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細胞培養(yǎng)成功以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些殊的細胞和分化征。傳代細胞形成細胞株的Zui大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液；２)向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)胞質回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶內培養(yǎng)液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞；６)用計數(shù)板計數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；７)細胞培養(yǎng)換液時間應根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般２～３d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马棥浚?掌握HAO細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；２)掌握HAO消化濃度，當消化液濃度過GAO時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。

細胞生長：貼壁

H-2291細胞類似產品：：SuDHL 4細胞、BCaP-37細胞、HeLa/DDP細胞

H522細胞類似產品：：HUASMC細胞、JHH-2細胞、Daudi細胞

LAN-5細胞類似產品：：GA-10細胞、HCC941122細胞、HEM-L細胞

M 1細胞類似產品：：32D.cl3細胞、NCIH187細胞、639 V細胞

NOZAWA細胞類似產品：：ME180細胞、NCI-SNU-878細胞、HepaRG細胞

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細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞培養(yǎng)過程中，總是會出現(xiàn)各種意想不到的問題，一不留神就會全盤皆輸。所謂細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。下面是貼壁細胞的保藏方法，希望對細胞培養(yǎng)初學操作者有所幫助：1)觀察細胞狀態(tài)：貼壁細胞密度達到85-90%，即可以細胞凍存形式進行保藏，拍照，記錄細胞狀態(tài)；2)細胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當細胞剛開始脫落時，立即轉移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉移至培養(yǎng)箱內繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細胞狀態(tài)，至細胞成流沙狀完全脫落，轉移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細胞離心：將終止消化后的細胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細胞凍存：離心后去除細胞上清液，按照凍存細胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應的凍存管中，進行凍存；6)細胞保藏：凍存管做HAO標記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉移至-80℃超低溫冰箱過夜，將過夜后的凍存細胞轉移至液氮中保藏。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

BTI-Tn-5B1-4細胞類似產品：：RMC細胞、H1581細胞、OKT 3細胞

Transformed Human Liver Epithelial-3細胞類似產品：：NRCC細胞、TE-1細胞、S.B.細胞

GP2d細胞類似產品：：CCD19Lu細胞、GM2131細胞、GM637細胞

TE 85.T細胞類似產品：：BE(2)M17細胞、RPTEC/TERT1細胞、GA-10 (Clone 4)細胞

UMRC-2細胞類似產品：：RBL細胞、NCI-H740細胞、CMT-93細胞

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分

MES13細胞類似產品：：FTC-133細胞、COLO201細胞、A-2780細胞

BT-20細胞類似產品：：Ramos (RA 1)細胞、H-1694細胞、MC-4細胞

LC-MS細胞類似產品：：NCIH1963細胞、SNU601細胞、NCI-H2170細胞

RL95-2細胞類似產品：：Clone 166細胞、GM03570細胞、Molm 13細胞

CHP-126細胞類似產品：：OKT 3細胞、CCC-HIE-2細胞、HOC1細胞

SNT8細胞類似產品：：CCD33Co細胞、OCI-LY-10細胞、HP615細胞

培養(yǎng)細胞真的不難，Zui關鍵幾點：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越HAO。另外，要掌握HAO胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細胞的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，Zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細胞不能進去太多人，避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細胞時有哪些經驗教訓可以分享呢?１)嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套；３)有可能的話在拿到新細胞的時候做HAO支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進去)；５)晚上離開的時候ZuiHAO給傳代細胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。

細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結構，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更HAO。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣GAO壓消毒)，２mL安瓿(或專用細胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天ZuiHAO換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或專用冷凍塑料管中，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記HAO細胞名稱和凍存日期，同時作HAO登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝HAO細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內;置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，Zui后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，ZuiHAO取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。

COLO 699細胞類似產品：：TE671/RD細胞、UCD-MLA-144細胞、ZR-75-30細胞

HT-115細胞類似產品：：32D.3細胞、HSMC細胞、A-172 MG細胞

NK92細胞類似產品：：HSC5細胞、PC-9/S1細胞、N1S1細胞

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F9 Cells(贈送Str鑒定報告)|小鼠畸胎瘤細胞

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GM04680細胞類似產品：：PL11細胞、KYSE270細胞、WSU-HN13細胞

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Namalwa細胞類似產品：：A 253細胞、CV-1 in Origin Simian-7細胞、Mc Ardle 7777細胞

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L-6 myoblast細胞類似產品：：P30-OHKUBO細胞、SKCO-1細胞、TALL-104細胞

COS-1細胞類似產品：：OACP4C細胞、H-2172細胞、CL-34細胞

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PC.3細胞類似產品：：SK-NM-C細胞、AZ 521細胞、SK-NM-C細胞

Be-Wo細胞類似產品：：BC-022細胞、SIRC細胞、3T3(A31)細胞

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NCI-H2291細胞類似產品：：NCI-H1299細胞、OCI-LY-19細胞、H1435細胞

SW-1783細胞類似產品：：FRhK4細胞、CHOK1細胞、U14細胞

CCD-33Co細胞類似產品：：HMC細胞、SKNEP-1細胞、SBC3細胞

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PLA801-95D細胞類似產品：：SJSA細胞、Panc05.04細胞、MPC 11細胞

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