"UMR-106 Cells(贈送Str鑒定報告)|大鼠骨肉瘤細胞

細胞背景資料：注射放射性同位素磷(３２P)誘導產生的可移植性大鼠骨肉瘤克隆建立了UMR-１０６細胞株。 細胞對PTH，前列腺素及破骨甾體有響應。 對PTH的響應度，UMR-１０６比相關細胞株UMR-１０８(ATCC CRL-１６６３)要高。 蛋白激酶C的活化抑制ATP誘導的胞內水平的升高。 起始骨肉瘤和克隆株都是University of Sheffield的T.J. Martin建立的。

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

解凍細胞常見實驗問題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細胞時，發(fā)現(xiàn)會出現(xiàn)存活率低、大量細胞碎片及生長緩慢等問題，究竟是什么原因導致，我們該怎么進行解決？以下是國內外細胞培養(yǎng)專家針對解凍細胞實驗問題，總結的一些解決方案！出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：１)解凍過程中細胞裂解，推薦的解決方案：可預期到一定量的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠GAO，考慮到這一損失。起始濃度為１*１０(６)至１*１０(７)細胞/毫升；２)解凍過程中的問題，推薦的解決方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時間為１-５天，但這不是保存的方法。在３７℃充分解凍后應立即開始培養(yǎng)；３)對冷凍液過敏，推薦的解決方案：A.完全或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在２４小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長階段中的位置。冷凍的Zui佳條件在對數(shù)期；４)被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養(yǎng)物的年齡，推薦的解決方案：解凍Zui近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態(tài)的時間越長，存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數(shù)期。

細胞生長：貼壁

Z-138細胞類似產品：：H838細胞、LNCaP-FGC細胞、D283 Med細胞

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UMR-106 Cells(贈送Str鑒定報告)|大鼠骨肉瘤細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞培養(yǎng)過程中，總是會出現(xiàn)各種意想不到的問題，一不留神就會全盤皆輸。所謂細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。下面是貼壁細胞的保藏方法，希望對細胞培養(yǎng)初學操作者有所幫助：1)觀察細胞狀態(tài)：貼壁細胞密度達到85-90%，即可以細胞凍存形式進行保藏，拍照，記錄細胞狀態(tài)；2)細胞清洗：培養(yǎng)皿表面消毒后，轉移至生物安全柜中，去除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)液，加入12mlPBS，輕輕搖晃培養(yǎng)皿清洗細胞，隨后吸除PBS清洗液；3)細胞消化：將2ml胰酶加入培養(yǎng)皿中，完全覆蓋細胞，置于顯微鏡下觀察（期間禁止搖晃培養(yǎng)皿），當細胞剛開始脫落時，立即轉移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余約0.5ml胰酶，轉移至培養(yǎng)箱內繼續(xù)消化，每30秒肉眼觀察細胞狀態(tài)，至細胞成流沙狀完全脫落，轉移至生物安全柜中，加入12ml完全培養(yǎng)基，終止消化；4)細胞離心：將終止消化后的細胞懸液吹打均勻，吸取至15ml離心管中，1000r/min（110g），離心3min；5)細胞凍存：離心后去除細胞上清液，按照凍存細胞量5*10^5/ml，吸取凍存液重懸細胞沉淀，吹打均勻后分裝至相應的凍存管中，進行凍存；6)細胞保藏：凍存管做HAO標記，放至程序降溫盒中，于4℃冰箱放置30min，轉移至-80℃超低溫冰箱過夜，將過夜后的凍存細胞轉移至液氮中保藏。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

NT2-D1細胞類似產品：：Lewis Lung細胞、SK-MES細胞、A253細胞

H2342細胞類似產品：：HGE細胞、3AA細胞、MC 3T3-E1細胞

NCTC 929細胞類似產品：：Panc02.03細胞、HPMEC細胞、S3 HeLa細胞

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CMT.64細胞類似產品：：Mv.1.Lu細胞、NCI-H2135細胞、Mel-RM細胞

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

UMR-106 Cells(贈送Str鑒定報告)|大鼠骨肉瘤細胞

細胞生長特性：貼壁

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細胞凍存的步驟：１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天ZuiHAO換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為５×１０６～１×１０７/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇；３)將分裝上述細胞懸液于２ml凍存管中，每管０.２５ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記HAO細胞名稱和凍存日期，同時作HAO登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))；４)將裝HAO細胞的凍存管放到凍存盒中，-８０℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-８０℃冰箱過夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后轉到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，ZuiHAO取出一只凍存管細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。

細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結構，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更HAO。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣GAO壓消毒)，２mL安瓿(或專用細胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天ZuiHAO換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或專用冷凍塑料管中，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記HAO細胞名稱和凍存日期，同時作HAO登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝HAO細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內;置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，Zui后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，ZuiHAO取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。

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