"NCI-H1836 Cells(贈送Str鑒定報告)|人小細胞肺癌細胞

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

解凍細胞出現(xiàn)大量細胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：１)冷凍時細胞密度過低：推薦的解決方案：縮短解凍過程中的時間。將細胞取出后，立即將凍存管浸入在３７℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉移到預熱的培養(yǎng)基中；２)不適當?shù)睦鋬鲞^程：推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當?shù)募夹g，并確保使用了適量和適合的冷凍液。出現(xiàn)生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：１)培養(yǎng)瓶的大?。阂话憬鉀Q方案是一些細胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉移到較小的培養(yǎng)瓶中，使細胞密度上升；如，根據(jù)培養(yǎng)基的體積，從T７５培養(yǎng)瓶轉移到２或３個T２５培養(yǎng)瓶中；２)細胞密度過低：通常解決方案是提GAO未來冷凍物種細胞的凍存密度，或使用較小的培養(yǎng)容器，或解凍多個試管來進行培養(yǎng)。

細胞生長：貼壁

RD-ES細胞類似產品：：BSC1細胞、H-810細胞、OCI-AML-4細胞

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NCI-H1836 Cells(贈送Str鑒定報告)|人小細胞肺癌細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養(yǎng)過程中生長不HAO、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不HAO》可能原因：細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養(yǎng)基或血清：1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；2)選擇的培養(yǎng)基是否合適；3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤；培養(yǎng)環(huán)境：1)CO2供應是否正常；2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；2)避免產生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養(yǎng)基，ZuiHAO經過驗證；4)注意實驗室的環(huán)境；二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因：1)培養(yǎng)箱內無CO2；2)培養(yǎng)箱內溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養(yǎng)液滲透壓不正確；5)培養(yǎng)液中有毒代謝產物堆積；解決方法：1)檢測培養(yǎng)箱內CO2；2)檢查培養(yǎng)箱內溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養(yǎng)液滲透壓；5)換入新鮮培養(yǎng)液。

細胞傳代方法：每周換液２-３次。

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細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

NCI-H1836 Cells(贈送Str鑒定報告)|人小細胞肺癌細胞

細胞生長特性：懸浮生長

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細胞凍存的步驟：１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天ZuiHAO換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為５×１０６～１×１０７/mL之間。(凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細胞類型來選擇；３)將分裝上述細胞懸液于２ml凍存管中，每管０.２５ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記HAO細胞名稱和凍存日期，同時作HAO登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))；４)將裝HAO細胞的凍存管放到凍存盒中，-８０℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-８０℃冰箱過夜，放入液氮罐)ZuiHAO;或者可以在４℃，２h;然后轉到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，ZuiHAO取出一只凍存管細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。

貼壁細胞的消化方法介紹：１、胰酶。這是用得Zui多的。一般濃度在０.２５-０.５%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。０.２５%的胰酶作用于單層貼壁的細胞，在３７度條件下，一般消化１-５分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于細胞間。配制時不能用含、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-２０度。２、膠原酶。這種方法比較少，一般是用原代培養(yǎng)時，從組織消化下細胞。這種方法作用溫和，對細胞損傷較小，但是，價格也較貴。中止同樣是用血清。３、EDTA。用得也是非常多。一般濃度在０.０２%左右。作用于細胞與間質，對細胞間也有一定作用。注意，它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶。因此，配制時應調節(jié)HAO酸堿度。它不能被終和。因此，消化下來的細胞要洗一遍。４、商品化的無酶消化液。個人的使用經常覺得對細胞的損傷比較大，但是分離成單細胞懸液的能力確實比較強。５、物理法。直接吹打或用細胞刮子將細胞刮下來。６、冷凍法。此方法僅能用于細胞傳代時。無法使組織上的細胞脫落下來。本方法的原理，我想是因細胞冷凍后收縮，從而從培養(yǎng)瓶上脫落下來。YOU點是：對細胞損傷小，不需要中止或洗細胞，方便，不需要另外配制消化液。別適用那些貼壁不是別緊，又別嬌氣的細胞。不足是細胞常成小片脫落。此種方法曾用于因用其它方法傳代導致大量細胞死亡操作的間充質干細胞、DC細胞的培養(yǎng)，效果非常滿意。具體過程是：１、用較多的４度的PBS 洗滌一遍細胞(以６孔板為例，加１.５ml/孔)，２、再加０.５毫升４度的PBS，靜置操作臺上，很快細胞就小片脫落，３、輕輕吹打，細胞即完全脫落，４、按一定比例傳代。

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NCI-H1836 Cells(贈送Str鑒定報告)|人小細胞肺癌細胞

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