"Hep 3B2.1-7 Cell|人肝癌細胞
細胞背景資料:肝癌;男性
細胞形態(tài):上皮細胞樣
接收細胞相關問題:如不能在收到細胞后及時操作細胞,T25及離心管發(fā)貨的細胞將可以消毒后在37度過夜,血清發(fā)貨的細胞在室溫下靜置1-2天(注意不要放冰箱),干冰發(fā)貨的可以在確認干冰未完全升華時將細胞直接放回液氮或者-80度冰箱,若干冰完全升華,請即刻復蘇細胞。T25瓶及離心管在培養(yǎng)箱平衡是為了讓細胞盡快適應培養(yǎng)箱環(huán)境,同時使部分因運輸導致脫落的細胞貼壁,此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細胞,可以收集上清后離心(1200rpm,5min)后,將沉淀用新的培養(yǎng)基重懸后接種至新的培養(yǎng)瓶或皿中。部分細胞在運輸過程中,由于不斷震蕩及環(huán)境不適,可能導致細胞破碎死亡,從而使培養(yǎng)基中漂浮很多細胞碎片及顆粒狀物質。這種情況下,平衡后,貼壁細胞用PBS洗兩遍再加新的培養(yǎng)基培養(yǎng)或者傳代至新瓶中培養(yǎng)即可;懸浮細胞可以離心(1000rpm,3min)收集細胞,并用PBS重懸后再離心一次,再用新的培養(yǎng)基重懸并接種細胞。
細胞生長:貼壁
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
Hep 3B2.1-7 Cell|人肝癌細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題,客戶遇到的問題從細胞生長角度來說,針對細胞培養(yǎng)過程中生長不HAO、甚至死亡的原因,我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不HAO》可能原因:細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數(shù)多,細胞老化;2)細胞的接種量:接種量過低,細胞生長緩慢;3)細胞傳代時間過晚:細胞中毒,影響傳代后的細胞生長;4)胰酶消化時間過長或過短:時間過長,細胞死亡;時間過短,細胞未完全分離而成團,細胞死亡;5)細胞的凍存與復蘇:慢凍速融。污染:1)支原體污染;2)霉菌污染;培養(yǎng)基或血清:1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證;2)選擇的培養(yǎng)基是否合適;3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤;培養(yǎng)環(huán)境:1)CO2供應是否正常;2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確;解決方法:根據(jù)以上四個方面的可能原因,做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài):如傳代次數(shù)、接種量等;2)避免產生污染(用正規(guī)、合法、可溯源的血清);3)要用合適的血清或培養(yǎng)基,ZuiHAO經(jīng)過驗證;4)注意實驗室的環(huán)境;二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因:1)培養(yǎng)箱內無CO2;2)培養(yǎng)箱內溫度波動太大;3)細胞凍存或復蘇過程中損傷;4)培養(yǎng)液滲透壓不正確;5)培養(yǎng)液中有毒代謝產物堆積;解決方法:1)檢測培養(yǎng)箱內CO2;2)檢查培養(yǎng)箱內溫度;3)取新的保存細胞種;4)檢測培養(yǎng)液滲透壓;5)換入新鮮培養(yǎng)液。
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細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁
細胞培養(yǎng)中的污染分為兩類,化學污染和生物污染;生物污染包括比較容易發(fā)現(xiàn)的細菌、霉菌和酵母的污染,和較難發(fā)現(xiàn)的病毒、支原體和其他細胞的污染。細菌、霉菌和酵母到處存在,它們能在合適的環(huán)境中非??焖俚纳L。這些污染比較容易觀察到,它們往往會使其污染的培養(yǎng)液產生可見的變化,或者通過顯微鏡觀察就可以看見。由于病毒有種屬異性,所以病毒污染的概率比較小。但是病毒污染難于發(fā)現(xiàn),因為病毒顆粒別微小,一般的實驗室都沒能力檢查細胞培養(yǎng)中污染的病毒。由于病毒一般潛伏在細胞內,對整個細胞培養(yǎng)不是致死的,所以它可能會使研究人員長期得到受病毒影響的細胞的實驗結果。1956年Robinson及其同事首次發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)中的支原體污染。90年代初的一個調查發(fā)現(xiàn),在美國培養(yǎng)的細胞中,至少有15%被支原體污染。由于支原體沒有細胞壁,在細胞培養(yǎng)液中幾乎是透明的,同時對常用于細胞培養(yǎng)中的抗生素不敏感,不引起pH變化,不使培養(yǎng)液渾濁,所以支原體污染不容易被發(fā)現(xiàn),但是其存在會影響實驗的結果。培養(yǎng)多種細胞時操作不當,會導致細胞的交叉污染。由于不同細胞的生產速率不同,污染的生長速率快的細胞終會完全取代被污染的細胞。
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關鍵字: Hep 3B2.1-7 Cell|人肝癌;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。