"L-5178-Y:小鼠淋巴瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：懸浮

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

BN-CL2細胞類似產品：：SW-1271細胞、OCI/AML-4細胞、Calu-3細胞

HNE1細胞類似產品：：RINm5F細胞、TE-14細胞、AX-Mel細胞

DMS-79細胞類似產品：：U031細胞、AM38細胞、UMUC1細胞

CNE1細胞類似產品：：OE33細胞、KMS-11細胞、HEK-293細胞

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

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細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣

Swiss-3T3細胞類似產品：：H-1688細胞、Capan2細胞、HCC1395細胞

NK-92.05細胞類似產品：：32D-Cl3細胞、H1573細胞、NCI-H146細胞

SK-OV-3細胞類似產品：：WM-239-A細胞、TCMK1細胞、NCIH2405細胞

培養(yǎng)細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術。細胞凍存在-１９６℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。【凍存細胞】１)選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數(shù)，使細胞密度達５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制HAO的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外；４)分裝于無菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋HAO凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做HAO標記；６)凍存：在殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時間內，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷?！緩吞K細胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時搖動，使其急速融化，３０～６０s內完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數(shù)量要充分，密度應達到１０／ml，在融后稀釋２０倍時，仍能保持５×１０／ml數(shù)量。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分

細胞培養(yǎng)中常用設施及設備：實驗室設計：細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養(yǎng)室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是無菌操作區(qū)設在室內較少走動的內側，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。常用設施及設備：1)超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側流式、直流式和外流式三大類。2)無菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機、倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒HAO的無菌物品等。3)操作間：普通培養(yǎng)箱、離心機、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物。4)洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。5)分析室：顯微鏡、計算機及打印機等。

H1781細胞類似產品：：MAC1細胞、mREC細胞、HEC151細胞

TPC-1細胞類似產品：：OUMS23細胞、D407 RPE細胞、RTE細胞

NPC-TW-039細胞類似產品：：MDAMB231細胞、OV433細胞、LWnt3A細胞

WC00059細胞類似產品：：GM01232細胞、LTEPa2細胞、NCI H157細胞

CCC-HEH-2細胞類似產品：：SK-GT-4細胞、Tn5 B1-4細胞、MESSADX5細胞

C-4-I細胞類似產品：：Capan2細胞、beta-TC6細胞、Jijoye細胞

ANA1細胞類似產品：：C-127細胞、KBM7細胞、H-2081細胞

SKG-IIIa細胞類似產品：：IOSE80細胞、BC-019細胞、H-2196細胞

1E8-H細胞類似產品：：RPMI 7666細胞、RBSMC細胞、LNCaP細胞

MC3T3-L1細胞類似產品：：C-Li-7細胞、BV2細胞、MES-SA-Dx5細胞

VAESBJ細胞類似產品：：ELD-1細胞、NCI-H322T細胞、MyLa2059細胞

TMD-8細胞類似產品：：293-FT細胞、SKNBE-2細胞、CEM-0細胞

SKBr3細胞類似產品：：Hs-281-T細胞、HFTF細胞、OAW 42細胞

M-NFS-60細胞類似產品：：ACC-2細胞、EOL1細胞、Caco-2 BBe細胞

Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細胞類似產品：：Hs729T細胞、BMU-S1細胞、Rca-B細胞

NT2細胞類似產品：：T1-73細胞、C 643細胞、NFHIOSE-80細胞

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MC-116細胞類似產品：：SBC3細胞、NPA87-1細胞、H-510細胞

PLC細胞類似產品：：Hs739T細胞、RPMI-1788細胞、OVCA-432細胞

P3X63 AG 8.653細胞類似產品：：C33細胞、P-2003細胞、PANC-10-05細胞

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LAN6細胞類似產品：：TE-8細胞、AD-293細胞、U373細胞

L-5178-Y:小鼠淋巴瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

THP-1細胞類似產品：：OVCAR420細胞、P388-D1細胞、High Five細胞

JB6Cl30細胞類似產品：：MLO-Y4細胞、H661細胞、DHL4細胞

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MAD109細胞類似產品：：Karpas422細胞、S16細胞、Hs-940細胞

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MLTC-1細胞類似產品：：MV3細胞、HemECs細胞、SK N SH細胞

H-2195細胞類似產品：：H-226細胞、Hs683細胞、D324 Med細胞

KGN細胞類似產品：：SO-RB50細胞、HS688AT細胞、SKCO1細胞

SW-1783細胞類似產品：：FRhK4細胞、Jeko1細胞、G 401細胞

SUM-102細胞類似產品：：H-1651細胞、IPAM-WT細胞、ACC-2細胞

NPC-TW-039細胞類似產品：：MDAMB231細胞、NCI.H23細胞、HCC1833細胞

MC3T3-E1 Subclone 14細胞類似產品：：P3/X63/Ag8.653細胞、FLS細胞、DMS 53細胞

Ku812F細胞類似產品：：159PT細胞、GC-2細胞、CD-18細胞

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Colon38細胞類似產品：：H125細胞、RC13細胞、JF305細胞

L78細胞類似產品：：L929(NCTC)細胞、HEC-151細胞、MCF-12F細胞

343 MG細胞類似產品：：SUD6細胞、alpha-TC1.6細胞、H-747細胞

CAL851細胞類似產品：：CPA 47細胞、SNU216細胞、hTERT-RPE-1細胞

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NSC34細胞類似產品：：NTera 2/cl.D1細胞、H.Ep. #2細胞、LC1-Sq細胞

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Wien133細胞類似產品：：CHL-CL-11細胞、BALL1細胞、LTEP-a2細胞

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AML-12細胞類似產品：：HEL 299細胞、H1672細胞、CEF細胞

Rat Chondrosarcoma Swarm細胞類似產品：：HL1細胞、HEK-293A細胞、MES 23.5細胞

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COS-1細胞類似產品：：OACP4C細胞、H-2172細胞、CL-34細胞

HN13細胞類似產品：：16-HBEo細胞、B16 F10細胞、R 1610細胞

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