通過(guò)5周2針的標(biāo)準(zhǔn)免疫程序制備小鼠單克隆和多克隆抗體,ELISA滴度(Cutoff值為0.1000)可達(dá)到1:10000-1:10000000。
1. 用生理鹽水將抗原稀釋到2倍最終濃度(按每針次50μl用量配制)。
備注:推薦使用的抗原用量為
(1)免疫原性較強(qiáng)的滅活全病毒或全細(xì)菌以及病毒樣顆??乖酷槾?-5μg;
(2)免疫原性較弱的亞單位蛋白抗原每針次5-20μg;
(3)偶聯(lián)了載體蛋白的小分子抗原每針次20-50μg。
2. 充分混勻佐劑,無(wú)菌條件下取出所需用量(按每針次50μl)與抗原按體積比1:1迅速混勻。
備注:本佐劑產(chǎn)生沉淀屬正?,F(xiàn)象,與抗原混合操作越快越好。
3. 通過(guò)后腿小腿肌肉注射免疫小鼠(
),每只小鼠注射100μl。
備注:本佐劑與抗原混合后產(chǎn)生沉淀屬正?,F(xiàn)象,抽入針管前應(yīng)充分混勻,抽入針管后應(yīng)盡快注射。
4. 第21天按同樣方式加強(qiáng)免疫1針。
備注:每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。
5. 第35天采微量尾血進(jìn)行ELISA測(cè)定,抗體滴度應(yīng)在1:10000-1:10000000范圍內(nèi),隨后即可采全血或按常規(guī)方法進(jìn)行抗原沖擊免疫和脾細(xì)胞融合。
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