熒光染料的優(yōu)點:
使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應條件的優(yōu)化得以解決。
總的來說,SYBR Green I方法是一種最基礎(chǔ)也最常用的Real-time qPCR實驗手段。
產(chǎn)品名稱 |
肝片吸蟲病通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 |
Fasciola spp. |
貨號 |
XGR96741 |
熒光化學物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的首選技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
多效坐標準品 對甲抑菌靈標準品 對流靈標準品 HumancytosolicphospholipaseA2,cPLA2ELISA試劑盒人胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 10%胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基 225ml/袋*10 用于金黃色葡萄球菌的MPN測定及增菌培養(yǎng) HT1080細胞,人成纖維肉瘤細胞 熱帶念珠菌 tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-1A3 AC肉湯5克
Nigrolineaxanthone V 7,12-二輕基-9-甲氧基-2,2-二甲基-10-(3-甲基-2-丁烯-1-基)-2H,6H-并[3,2-B]氧雜意 864516-31-4 ELISAKitTpP犬血栓前體蛋白規(guī)格:48T/96T 蛹蟲草(北冬蟲夏草、北蟲草) 支/瓶 APOH Others Human 人 APOH / B2G1 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-基-2′,3-二甲基偶氮本,英文名或英文縮寫:Fast garnet GBC base,級別:高純,70%,規(guī)格:100克
Nigrolineaxanthone V 7,12-二輕基-9-甲氧基-2,2-二甲基-10-(3-甲基-2-丁烯-1-基)-2H,6H-并[3,2-B]氧雜意 864516-31-4 ELISAKitTpP犬血栓前體蛋白規(guī)格:48T/96T 蛹蟲草(北冬蟲夏草、北蟲草) 支/瓶 APOH Others 肝片吸蟲病通用探針法熒光定量PCR試劑盒Human 人 APOH / B2G1 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-基-2′,3-二甲基偶氮本,英文名或英文縮寫:Fast garnet GBC base,級別:高純,70%,規(guī)格:100克
六那唑 標準品 CAS號:79983-71-4 100mg CLIAKitforLp-AlphaELISAKit大鼠脂蛋白α規(guī)格:48T/96T PlateCountAgar U-2 OS, 人骨肉瘤細胞 神經(jīng)母細胞瘤細胞,LAN-6細胞 COS-7(SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞) 聚乙二醇單硬脂酸酯 Polyoxyethylene stearate,n(=:)10 9004-99-3 25G 通用試劑
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
關(guān)鍵字: 肝片吸蟲病通用探;探針法;熒光定量PCR試劑盒;Fasciola spp.;XGR96741;
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上海西格生物科技有限公司(Shanghai Sig Biotechnology Co., Ltd)先后與天津中醫(yī)學院、復旦大學、上海交通大學醫(yī)學院、上海交通大學、華東師范大學、第二軍醫(yī)大學、南京大學,暨南大學,南京工業(yè)大學,曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標本的試劑盒;另有針對各種動物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚)的科研試劑。
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