細(xì)胞凍存：
對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行凍存的方法是將細(xì)胞置于含有(DMSO)等冷凍保護(hù)劑的完全培養(yǎng)基中于液氮中儲存。冷凍保護(hù)劑可降低培養(yǎng)基的冰點，并可減緩冷卻速度嗎，大大降低冰晶形成的危險  (冰晶可損傷細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞死亡)。
注：DMSO 可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。操作含DMSO的試劑時，應(yīng)采用與此類物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范，并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。 
細(xì)胞凍存指導(dǎo)原則
凍存細(xì)胞系以備將來之用時，必須遵守以下原則。與其他細(xì)胞培養(yǎng)操作一樣，我們建議您嚴(yán)格遵守您所用細(xì)胞系附帶的操作說明，以便獲得結(jié)果。 
1）在高細(xì)胞濃度情況下進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，并且細(xì)胞傳代次數(shù)盡可能少。確保凍存前活細(xì)胞百分比至少為90%。請注意凍存條件取決于所用細(xì)胞系。 
2）細(xì)胞應(yīng)緩慢冷凍，可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3）必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑
4）將冷凍的細(xì)胞于 -70°C 以下溫度儲存；溫度高于 -50°C 時，冷凍的細(xì)胞將開始變質(zhì)。 
5）必須使用無菌凍存管儲存冷凍的細(xì)胞。裝有冷凍細(xì)胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內(nèi)保存 
6）必須穿戴個人防護(hù)設(shè)備。 
7）所有與細(xì)胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無菌狀態(tài)。必須采用正確的無菌技術(shù)，并且在層流通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。
小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物胞是從小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取的，小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞從正常小鼠腸靜脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腸靜脈內(nèi)皮胞組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線

兔耳草醛Human TP(Thymidine Phosphorylase) ELISA Kit

兔耳草醛Human TP/TXA2R(Thromboxane Receptor) ELISA Kit

三氯化鐵,六水合物Human TP5(Thymopentin) ELISA Kit

三氧化二鐵Human Total P53(Tumor Protein p53) ELISA Kit

4-碘-1H-咪唑Human TP63(Tumor Protein p63) ELISA Kit

4-碘-1H-咪唑Human tPA(Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit

離子霉素Human TPA(Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit

離子霉素Human TPPP(Tubulin Polymerization Promoting Protein) ELISA Kit

離子霉素Human TPS(Tryptase) ELISA Kit

異喹啉羧酸Human TrxR1(Thioredoxin Reductase 1) ELISA Kit

異喹啉羧酸Human TRY(Trypsin) ELISA Kit

異丙醇Human TSHRAb(Thyroid Stimulating Hormone Receptor Antidoby) ELISA Kit

異丙醇Human TSP-1(Thrombospondin-1) ELISA Kit

異丙醇Human TSPAN30/CD63(Tetraspanin 30) ELISA Kit

異丙醇Human TWEAK(Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis) ELISA Kit
小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物胞規(guī)格腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基吲哚-3-甲醛 97%Calprotectin

膽汁液態(tài)培養(yǎng)基氯化鋯 ≥99.99% metals basisGlycyl proline dipeptidyl aminopeptidase

假單胞菌瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基/CN 瓊脂二甲基硅油   用于油浴,180°CGlycine N-methyltransferase

萘啶酮酸 1.5mg氧化鋅 AR，99%Mannose Associated Serine Protease 2

甘油氧化鋅 CP，99%mannan binding lectin associated serine protease

金氏 B 培養(yǎng)基氧化鋅 電子級Mannma binding protein;mannan binding lectin

乙酰胺肉湯氧化鋅 99.999% metals basismannose receptor

氧化酶試紙氧化鋅 SPglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase

鈉氏試劑氧化鋅 99.99% metals basisTriglyceride

培養(yǎng)基氧化鋅 分析標(biāo)準(zhǔn)品，絡(luò)合量：12.280mmol/ghepatoma-derived growth factor

庖肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)氧化鋅 藥典級（Ph. Eur., BP, USP, 99-100.5%）ephrin-B3

庖肉牛肉粒四丁基氟化銨，三水 90%heparin cofactor Ⅱ

庖肉培養(yǎng)基四丁基乙酸銨 97%heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。