細胞凍存：
對培養(yǎng)的細胞進行凍存的方法是將細胞置于含有(DMSO)等冷凍保護劑的完全培養(yǎng)基中于液氮中儲存。冷凍保護劑可降低培養(yǎng)基的冰點，并可減緩冷卻速度嗎，大大降低冰晶形成的危險  (冰晶可損傷細胞，導致細胞死亡)。
注：DMSO 可促進有機分子進入組織。操作含DMSO的試劑時，應采用與此類物質安全危害相適應的設備和操作規(guī)范，并應按照當地法規(guī)處置此類試劑。 
細胞凍存指導原則
凍存細胞系以備將來之用時，必須遵守以下原則。與其他細胞培養(yǎng)操作一樣，我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說明，以便獲得結果。 
1）在高細胞濃度情況下進行培養(yǎng)細胞的凍存，并且細胞傳代次數盡可能少。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意凍存條件取決于所用細胞系。 
2）細胞應緩慢冷凍，可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3）必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑
4）將冷凍的細胞于 -70°C 以下溫度儲存；溫度高于 -50°C 時，冷凍的細胞將開始變質。 
5）必須使用無菌凍存管儲存冷凍的細胞。裝有冷凍細胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內保存 
6）必須穿戴個人防護設備。 
7）所有與細胞接觸的溶液和設備均應為無菌狀態(tài)。必須采用正確的無菌技術，并且在層流通風櫥內進行。
人腦動脈血管平滑肌細胞提取物是從人原代腦動脈血管平滑肌細胞提取的，人原代腦動脈血管平滑肌細胞從正常人腦動脈血管平滑肌組織制備。正常人腦動脈血管平滑肌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人腦動脈血管平滑肌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d，繪制細胞生長曲線

FMOC-N-甲基-L-苯丙氨酸Human UCP2(Mitochondrial uncoupling protein 2) ELISA Kit

FMOC-N-甲基-L-苯丙氨酸Human UCP1(Mitochondrial brown fat uncoupling protein 1) ELISA Kit

FMOC-N-甲基-L-苯丙氨酸Human LRP1(Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1) ELISA Kit

Fmoc-O-叔丁基-L-谷氨酸Human COQ10B(Coenzyme Q-binding protein COQ10 homolog B, mitochondrial) ELISA Kit

Fmoc-O-叔丁基-L-谷氨酸Human QPCTL(Glutaminyl-peptide cyclotransferase-like protein) ELISA Kit

肌氨酸Human SELENBP1(Selenium-binding protein 1) ELISA Kit

肌氨酸Human CCR3(C-C chemokine receptor type 3) ELISA Kit

肌氨酸Human DMP1(Dentin matrix acidic phosphoprotein 1) ELISA Kit

2,5-呋喃二甲酸Human PION(Gamma-secretase-activating protein) ELISA Kit

2,5-呋喃二甲酸Human ALAD(Delta-aminolevulinic acid dehydRatase) ELISA Kit

3-氟-4-硝基吡啶Human FECH(Ferrochelatase, mitochondrial) ELISA Kit

3-氟-4-硝基吡啶Human QPCT(Glutaminyl-peptide cyclotransferase) ELISA Kit

3-氟-4-硝基吡啶Human DDOST(Dolichyl-diphosphooligosaccharide--protein glycosyltransferase 48 kDa subunit) ELISA Kit

3-氟-4-硝基吡啶Human PDPN(Podoplanin) ELISA Kit

3-氟-4-硝基吡啶Human MCL1(Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1) ELISA Kit
人腦動脈血管平滑肌細胞提取物規(guī)格 普拉西坦油酸 85%alpha-amylase,AMY1 ELISA Kit

 阿尼西坦油酸 藥用級α-galactoyl,α-Gal ELISA Kit

 鈮鋯絲（棒）軟脂酸 ARα-galactosidase,αGAL ELISA Kit

 苯甲基硅油軟脂酸 CPαN-acetylglucosaminidase,αNAG ELISA Kit

 2,7-二羥基萘軟脂酸 97%alpha-L-fucosidase,AFU ELISA Kit

 5-(6)-羧基羅丹明6G硬脂酸 40%，熔點54.0-57.0℃α-L-iduronidase,IDUA ELISA Kit

 頭孢唑蘭十三醇 97%α2-Antiplasmin,α2-AP ELISA Kit

 醋硝香豆素十四醇 CP,95%α2 MG ELISA Kit

 鹽酸川芎嗪十四醇 AR,98.0%AHSG antibody ELISA Kit

 五味子素十四醇 Standard for GC, ≥99.5% (GC)AMBP ELISA Kit

 2,3,5,6-四氟苯酚鉀鹽氘代甲基環(huán)己烷-d14 D,99.5%α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit

 4-(3-三氟甲基苯基)哌啶鹽酸鹽N'-對甲苯磺?；?L-精氨酸 98%AACT ELISA Kit

 2-氯-4-硝基苯-a-L-巖藻糖苷L-精氨酰胺二鹽酸鹽 98%α1-Antitrypsin,α1-AT ELISA Kit
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。