培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
以下是人肝癌組織源細胞培養(yǎng)的訂購信息：

       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
N-(4-馬來酰亞胺丁?；?琥珀酰亞胺Human S1PR5(Sphingosine 1-phosphate receptor 5) ELISA Kit

4,4'-二甲氧基二苯基胺Human IL31RA(Interleukin-31 receptor subunit alpha) ELISA Kit

4,4'-二甲氧基二苯基胺Human ANXA3(Annexin A3) ELISA Kit

二硫化二苯并噻唑Human ANXA1(Annexin A1) ELISA Kit

二硫化二苯并噻唑Human NCOR2(Nuclear receptor corepressor 2) ELISA Kit

2-二環(huán)己基膦-2′,4′,6′-三異丙基聯(lián)苯金(I)雙(三氟甲烷磺酰)亞胺Human NCOA1(Nuclear receptor coactivator 1) ELISA Kit

2-二環(huán)己基膦-2′,4′,6′-三異丙基聯(lián)苯金(I)雙(三氟甲烷磺酰)亞胺Human GRIN1(Glutamate Receptor, Ionotropic, N-Methyl-D-Aspartate 1) ELISA Kit

2,3-二甲基吡嗪Human HEPH(Hephaestin) ELISA Kit

2,3-二甲基吡嗪Human C1QC(Complement C1q subcomponent subunit C) ELISA Kit

亞氨基二乙酸二乙酯Human SIRT4(NAD-dependent ADP-ribosyltransferase sirtuin-4) ELISA Kit

亞氨基二乙酸二乙酯Human GDF11(Growth/differentiation factor 11) ELISA Kit

鉛試劑Human FABP5(Fatty acid-binding protein, epidermal) ELISA Kit

3,6-二碘-9H-咔唑Human PFN2(Profilin-2) ELISA Kit

3,6-二碘-9H-咔唑Human NCOR1(Nuclear receptor corepressor 1) ELISA Kit

二苯并呋喃Human NDN(Necdin) ELISA Kit
人肝癌組織源細胞培養(yǎng)aGT(Human angiotensinogen) ELISA Kit  人血管緊張素原射干苷 分析標準品，>98% Phosphoglycolate phosphatase,PGP ELISA kit

aGT ELISA Kit  大鼠血管緊張素原鳶尾黃素 分析標準品，≥98%phosphoenolpyruvate carboxykinase,PCK ELISA Kit

AGPA/PCA(Human anti-gastric parietal cell antibody) ELISA Kit  人抗胃壁細胞抗體鳶尾黃素 分析標準品，≥97% PCK2 ELISA Kit

Ag-NORs(Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins) ELISA Kit  人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白辣椒素 分析標準品，>98%phosphogluconate dehydrogenase,PGD ELISA kit

a-Glu(Mouse Alpha-Glucosidase) ELISA Kit  小鼠α葡萄糖苷酶溴苯 CP,98.0%cancerous inhibitor of PP2A,CIP2A ELISA Kit

a-Glu ELISA Kit  大鼠α葡萄糖苷酶溴苯 99.5%phosphoglycerate kinase 1,PGK1 ELISA kit

AGEs(Mouse advanced glycation end products) ELISA Kit  小鼠晚期糖基化終末產物溴苯 AR,99%Phosphotylinosital 3 kinase,PI3K ELISA Kit

AGEs ELISA Kit  大鼠晚期糖基化終末產物溴苯 Standard for GC,>99.5%(GC)Phosphorylated acetyl CoA,PaCoA ELISA Kit

AGAA(Human anti-golgi apparatus antibody) ELISA Kit  人抗高爾基體抗體3-溴丙酸 98%phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,pAMPK ELISA Kit

AGA(Human anti-gliadin antibody) ELISA Kit  人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體1,8-二溴辛烷 98%phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit

AFU(Mouse alpha-L-fucosidase) ELISA Kit  小鼠αL巖藻糖苷酶1,6-二溴己烷 97%phospho glycogen synthase kinase 3,pGSK-3 ELISA Kit

AFU(Human alpha-L-fucosidase) ELISA Kit  人αL巖藻糖苷酶2-乙基己基二苯基磷酸酯 90%Phosphorylated Myosin Light Chain,PMLC ELISA Kit

AFU ELISA Kit  大鼠αL巖藻糖苷酶4-異丙基苯甲酸  98%phospho Protein Kinase C,P-PKC ELISA Kit
實驗報告：
一分離與培養(yǎng)：
    1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
    4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
    1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
    2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
    4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
    5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
    6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。