PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱：霍亂弧菌和群PCR 試劑盒
英文名稱：詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
編號(hào)： FSP2520
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 產(chǎn)品僅供科研從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集：
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時(shí)，吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的吸收光譜在 500nm，發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
小鼠腎集合管上皮細(xì)胞Human KITLG(Kit ligand) ELISA Kit二甲基亞砜肝竇內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞Human TIE1(Tyrosine-protein kinase receptor Tie-1) ELISA Kit二甲基亞砜胰腺星狀細(xì)胞
小鼠腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞Human TNFRSF1A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A) ELISA Kit二甲基亞砜胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞
小鼠腎系膜細(xì)胞Human TNFRSF1B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B) ELISA Kit二甲基亞砜腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠腎小管上皮細(xì)胞Human GRN(Granulins) ELISA Kit二甲基亞砜腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞Human TNFSF10(Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand) ELISA Kit地塞米松肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠腎小球足細(xì)胞Human AMH(Muellerian-inhibiting factor) ELISA Kit地塞米松肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
小鼠食管成纖維細(xì)胞Human APOC1(Apolipoprotein C-I) ELISA Kit地塞米松小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞
霍亂弧菌和群PCR 試劑盒Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-chicken IgM/AP 堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗雞IgM 4-溴-1-萘胺乳中摻硼砂快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
Hormographiella aspergillata Guarro et al., ..Rabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗雞IgM (1R,2R)-2-Amino-1-phenylpropyldiphenylphosphine, m乳中摻焦亞硫酸鈉快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
Pseudomonas sp.Rabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗雞IgM 2-戊基吡啶乳中摻廣告白或白球粉的快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
Sordaria brevicollis Olive et FantiniRabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗雞IgM 3-四氫呋喃酮乳品中蛋白質(zhì)快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
Mycobacterium arosiaeRabbit Anti-chicken IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗雞IgM 3-乙氧基苯甲醛牛乳新鮮度快速測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Rabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgM Linifanib (ABT-869)牛奶中摻入尿素的快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
Homo sapiens, humanRabbit Anti-chicken IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgM 2-溴-4-氟芐醇牛奶中摻入芒硝（硫酸鹽）的快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
Penicillium aurantiogriseum var.viridicat ..Rabbit Anti-chicken IgM/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗雞IgM 2-溴-4-甲基-1,3-噻唑-5-甲酸乙酯牛奶中摻入硫化物的快速檢測(cè)說(shuō)明書(shū)
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
關(guān)鍵字： 霍亂弧菌和群;PCR試劑盒;50T;FSP2520;
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)是一家生物企業(yè),主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。主營(yíng)產(chǎn)品:生化試劑、試劑盒、ELISA試劑盒、抗體、重組蛋白、生化檢測(cè)試劑盒、分光光度法檢測(cè)試劑盒、熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞株、原代細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai?Fusheng?Industrial?Co.,?Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒，種屬標(biāo)本齊全,有專門(mén)針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒；另有針對(duì)各種動(dòng)物（鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú)）的科研試劑。
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