產(chǎn)品名稱：大腸埃希菌(大腸O)stx(bp)和stx(bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒
英文名稱：詳見說明書
編號： FSP2444
分類：PCR檢測試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、產(chǎn)品僅供科研制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
數(shù)據(jù)采集：
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時，吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時的吸收光譜在 500nm，發(fā)射光譜在 530nm。
數(shù)據(jù)處理:
以 Cps 陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計(jì)算出樣品 DNA 的濃度。
人舌鱗癌細(xì)胞，Tca-8113細(xì)胞anti- Visfatin antibody2,3-二甲基苯硼酸兔冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞

人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，LN-18細(xì)胞anti- vitamin D binding protein antibody2,3-二甲基苯硼酸兔冠狀動脈平滑肌細(xì)胞

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，SH-SY5Y細(xì)胞anti- Vitamin D binding protein antibody3,3'-二甲氧基聯(lián)苯胺兔海馬神經(jīng)元

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，SK-N-SH細(xì)胞anti- Vitronectin antibody3,3'-二甲氧基聯(lián)苯胺兔海綿體平滑肌細(xì)胞

人神經(jīng)內(nèi)分泌分化的結(jié)腸癌細(xì)胞上皮細(xì)胞，LCC18細(xì)胞anti- VLDLR antibody3,3'-二甲氧基聯(lián)苯胺兔頜下腺上皮細(xì)胞

人神經(jīng)內(nèi)分泌前列腺癌細(xì)胞，NCI-H660細(xì)胞anti- VMA21 antibody二苯氨基脲兔滑膜成纖維細(xì)胞

人腎癌Wilms細(xì)胞，G401細(xì)胞anti- VMAT2 antibody二苯氨基脲兔脊髓神經(jīng)元

人腎癌細(xì)胞，A498細(xì)胞anti- VMO1 antibody脫氫乙酸兔甲狀腺成纖維細(xì)胞
大腸埃希菌(大腸O)stx(bp)和stx(bp)常規(guī)PCR檢測試劑盒human immunodeficiency virus - 1Protein C inhibitor/SerpinA5  蛋白C抑制因子抗體 (R)-1-Boc-3-二甲氨基吡咯烷黃曲霉毒素B1免疫親和柱

freeze-driedRobo  軸突導(dǎo)向受體抗體 4,6-二氨基-2-巰基嘧啶嘔吐毒素免疫親和柱

Podospora bicolor Cailleux, teleomorphRobo4  腫瘤血管內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白Robo4抗體 2,5-二氟-3-甲基苯腈嘔吐毒素免疫親和柱

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Klotho  Klotho多肽蛋白抗體 4-氨基-2-氯-3-氟苯酚玉米赤霉烯酮免疫親和柱

Microsporum cookei Ajello, anamorphEPDR1  哺乳動物室管膜相關(guān)蛋白1抗體 3-三氟甲基-1H-5-氯吡唑玉米赤霉烯酮免疫親和柱

Phaeosphaeria halima (Johnson) Shoemaker et ..ADAMTSL2  整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣2蛋白抗體 四-(4-甲氧基苯)乙烯赭曲霉毒素A免疫親和柱

Fusarium oxysporum f. sp.lycopersici (Sa ..Myosin heavy chain 1  肌球蛋白重鏈抗體 (9-苯基-9H-咔唑-2-基)硼酸可溶性表達(dá)宿主菌HB2151

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..TBCD4/TBC1D4  TBC結(jié)構(gòu)域TBCD4蛋白抗體 6-乙基吡啶-3-硼酸融合表達(dá)宿主菌TG1